B hepatito PCR

Norint gauti šiuolaikinius anti-hepatito B (HBV) vaistus, turinčius aiškių jų vartojimo indikacijų, reikia tiksliai ir greitai patikrinti diagnozę. Tačiau dėl trūkstamų klinikinių duomenų pirmosiomis ligos savaitėmis ir ribotais imuninės analizės metodais mažėja diagnozės greitis.

Markerių anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe buvimas leidžia patvirtinti HBV arba nustatyti ankstesnės ligos faktą. Tačiau galima nustatyti aktyvių virusinių dalelių buvimą kraujyje ir skaičiuoti jų skaičių tyrimo metu pagal PCR - kiekybinį realaus laiko testą hepatito B aptikimui. Metodas, lyginant su ELISA diagnostiniais metodais, išsprendžia diagnostines problemas ir leidžia prognozuoti ligos eigą gaunant antivirusinių vaistų.

Ligos diagnostikos pagrindai

B hepatito diagnostika grindžiama klinikinių požymių, fermentų imunologinio tyrimo ir instrumentinių tyrimo metodų įvertinimu. Liga pasireiškia ūminėje fazėje po inkubacijos laikotarpio ir, priklausomai nuo infekcijos dozės ir gydymo veiksmingumo, patenka į lėtinę stadiją. Pagrindinis gydymo tikslas yra užkirsti kelią chronizacijai, ty visų virusinių dalelių pašalinimui iš kraujo. Klinikinė ligos eiga yra išgydyti be vėlesnės viremijos.

Infekcijos pašalinimo faktas turi būti įrodytas kiekybiniu tyrimo metodu.

Kadangi bet kuris kokybinis fermento imunologinis tyrimas leidžia netiesiogiai diagnozuoti HBV, tai reiškia, kad jis neparodo patogeno buvimo kūno vidinėje aplinkoje, bet apibūdina imuninį atsaką į infekciją, stebėti gydymo veiksmingumą ir gydymo faktą sunku įrodyti. Todėl, norint kiekybiškai nustatyti virusinių dalelių kiekį kraujyje, pacientas, turintis hepatito B ar jo naudai diagnozavimo kriterijų, turėtų būti atliekamas polimerazės grandinės reakcijoje. Diagnostinis greitis yra infekcijos DNR kopijų trūkumas.

Diagnostinio metodo aprašymas

Labai jautrus hepatito B PCR diagnozavimo metodas priklauso genetiškai modifikuotų molekulinių biologinių tyrimų kategorijai. Per jį lemia viruso DNR kiekis biologinėje paciento medžiagoje ir leistinas greitis. Remiantis gautais rezultatais nustatomas virusų dalelių kiekis tūrio vienetui. Diagnostinio tyrimo medžiaga yra paciento veninis kraujas. Dėl galimo chyle serumo poveikio tyrimo rezultatui pageidautina vartoti tuščią skrandį.

Gauti rezultatai turi būti pateikti gydytojui tolesnės taktikos aiškinimui ir nustatymui. Nepriklausomas dekodavimas neatspindi diagnostinės vertės.

PCR metodu gautų virusinių dalelių skaičiaus rezultato reikšmė viršija fermento imuninių tyrimų vertę. Kadangi realaus laiko analizė rodo ligos sukėlėjo buvimą kraujyje, jo informacijos turinys yra didesnis nei kiti. Jei ELISA rodo tik antikūnų buvimą, kuris pastebimas nuo 4 savaičių inkubacijos laikotarpio ir trunka ilgiau kaip 8 savaites po viruso išsiskyrimo iš kraujo, polimerazės grandininė reakcija aiškiai patvirtina aktyvų ligos eigą arba jo išgydyti, apibūdina paskirtos terapijos dinamiką.

Polimerazės grandininė reakcija su kiekybiniu patogenų dalelių nustatymu išsprendžia diagnostinius klausimus, skatinančius nutraukti gydymą dėl atsigavimo ar tęstinio gydymo, nes trūksta veiksmingumo. Šis metodas yra kuo konkretesnis HBV virusui ir pasižymi priimtina klaida.

Indikacijos ir veiklos tikslai

Hepatito B kiekybinė analizė yra patikimiausia ir leidžia patvirtinti ELISA metodais gautus duomenis. Jis skiriamas, kai:

  1. gauti teigiamą ELISA diagnostinį rezultatą;
  2. paciento gydymas nustatytu virusinės kepenų pažeidimo diagnozės nustatymu;
  3. diagnozuojant mišrią etiologiją;
  4. jei reikia, nustatykite paciento virusinę apkrovą.

Kadangi infekcinių ligų gydytojo praktikoje fermentų imunologinio tyrimo metodas yra plačiau naudojamas, kai kuriems pacientams, sergantiems lengva liga, galima gydyti nereikia skaičiuoti virusinės apkrovos. Tačiau PCR paprastai laikomas „aukso standartu“ diagnozėje hepatologijoje, nes dėl savo rezultatų unikalumo jis pašalina keletą organizacinių klausimų. Todėl paciento kryptis kiekybinei analizei turi šiuos tikslus:

  • gauti duomenis apie virusinių dalelių skaičių paciento kraujyje;
  • ūminio hepatito eigos patvirtinimas ir laiku atliekamas lėtinės ligos patikrinimas;
  • nuolatinis latentinių virusų nešėjų aptikimas su teigiamais ELISA testais, jų viremijos stebėjimas;
  • nuspręsti dėl antivirusinio gydymo paskyrimo, jų derinimo ir nutraukimo.

Svarbiausias tikslas kiekybiniam PCR testui HBV aptikti yra nustatyti galimus gydymo derinius. Aukštos virusinės apkrovos atvejais analizės rezultatas suteikia specialistui galimybę tęsti vaistų derinį. Gydymo metu lengva nustatyti nustatyto farmakologinio gydymo veiksmingumą, remiantis PGR rezultatais. Vadovaujantis tik imuninės analizės metodų duomenimis, neįmanoma laiku nustatyti gydymo fakto ir jo dabartinio veiksmingumo. Todėl prieš pradedant gydymą ūmaus hepatito, latentinio viruso infekcijos, turinčios didelę viremiją ir lėtinę HBV, būtina atlikti kiekybinį tikralaikį bandymą.

Kiekybinių PCR bandymų rezultatų interpretavimas

Kiekybinio PCR tyrimo rezultatų interpretaciją turėtų atlikti paciento gydytojas. Būtina įvertinti diagnostinį indikatorių ir nustatyti gydymo taktiką.

Standartinis analizatorius gali sukurti kiekybinį rodiklį, atspindintį tiriamame veniniame kraujyje esančio virusinės DNR kopijų skaičių. Matavimo vienetai - kopijos / ml, TV / ml (kopijos mililitre, tarptautiniai vienetai mililitre). Rezultatų aiškinimas pateikiamas lentelėje, nurodant skirtingus matavimo vienetus.

B hepatito viruso tyrimai (ELISA ir PCR) t

Hepatito B viruso antigenas (HBsAg)

Hepatito B paviršiaus antigenas serume paprastai nėra.
B hepatito paviršiaus antigeno (HBsAg) nustatymas serume patvirtina ūminę arba lėtinę hepatito B viruso infekciją.

Ūminės ligos metu HBsAg nustatomas serume per paskutines 1-2 inkubacijos laikotarpio savaites ir pirmąsias 2-3 klinikinio laikotarpio savaites. HBsAg cirkuliacija kraujyje gali būti apribota iki kelių dienų, todėl turėtumėte stengtis anksti ištirti pacientus. ELISA metodas leidžia aptikti HBsAg daugiau nei 90% pacientų. Beveik 5% pacientų, jautriausi tyrimo metodai HBsAg neaptinka, tokiais atvejais viruso hepatito B etiologiją patvirtina anti-HBcAg JgM arba PCR.

HBsAg koncentracija serume visose hepatito B sunkumo formose ligos aukštyje turi didelį svyravimų diapazoną, tačiau yra tam tikras modelis: ūminiu laikotarpiu tarp HBsAg koncentracijos serume ir ligos sunkumo yra atvirkštinis ryšys.

Aukštos HBsAg koncentracijos dažniau būna lengvos ir vidutinio sunkumo ligos formos. Sunkių ir piktybinių formų atveju HBsAg koncentracija kraujyje dažnai yra maža, o 20% pacientų, sergančių sunkia forma, o 30% - piktybinių antigenų kiekis kraujyje, gali būti visai nenustatytas. Pacientų, sergančių antikūnais prieš HBsAg, atsiradimas šiame fone laikomas nepalankiu diagnostiniu ženklu; jis nustatomas piktybinėmis hepatito B formomis.

Ūminio hepatito B metu HBsAg koncentracija kraujyje palaipsniui mažėja iki visiško šio antigeno išnykimo. Daugeliui pacientų HBsAg išnyksta per 3 mėnesius nuo ūminės infekcijos pradžios.

HBsAg koncentracijos sumažėjimas daugiau nei 50% iki ūminio periodo trečiojo savaitės pabaigos, kaip taisyklė, rodo, kad infekcijos procesas yra baigtas. Paprastai pacientams, kurių ligos aukštyje yra didelė HBsAg koncentracija, ji nustatoma kelis mėnesius.
Pacientams, kurių HBsAg koncentracija yra nedidelė, ji išnyksta daug anksčiau (kartais praėjus kelioms dienoms nuo ligos pradžios). Apskritai HBsAg aptikimo laikas svyruoja nuo kelių dienų iki 4-5 mėnesių. Didžiausias HBsAg nustatymo laikotarpis su sklandaus ūminio hepatito B eiga neviršija 6 mėnesių nuo ligos pradžios.

HBsAg galima rasti sveikų žmonių, paprastai, profilaktikos ar atsitiktinių tyrimų metu. Tokiais atvejais tiriami kiti virusinio hepatito B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg žymenys ir tiriama kepenų funkcija.

Neigiamų rezultatų atveju būtina atlikti pakartotinius HBsAg tyrimus.
Jei pakartotiniai kraujo tyrimai ilgiau nei 3 mėnesius atskleidžia HBsAg, šis pacientas klasifikuojamas kaip lėtinis pacientas, sergantis virusiniu hepatitu B.
HBsAg yra gana dažnas. Pasaulyje yra daugiau nei 300 mln. Vežėjų, o mūsų šalyje yra apie 10 mln.
HBsAg cirkuliacijos nutraukimas ir vėlesnė serokonversija (anti-HBs susidarymas) visada rodo, kad organizmas atsinaujina.

Kraujo tyrimas dėl HBsAg buvimo yra naudojamas šiems tikslams:

  • diagnozuojant ūminį hepatitą B:
    • inkubacijos laikotarpis;
    • ūminė liga;
    • ankstyvas atkūrimas;
  • diagnozuoti lėtinį virusinį hepatitą B;
  • dėl ligų:
    • nuolatinis lėtinis hepatitas;
    • kepenų cirozė;
  • rizikos grupių pacientams tikrinti ir nustatyti:

  • pacientams, kuriems dažnai pasireiškia hemotransfuzija;
  • pacientams, sergantiems lėtiniu inkstų nepakankamumu;
  • pacientams, kuriems yra daug hemodializės;
  • pacientams, sergantiems imunodeficito būsenomis, įskaitant AIDS.
  • Tyrimo rezultatų vertinimas

    Tyrimo rezultatai išreiškiami kokybiškai - teigiami arba neigiami. Neigiamas rezultatas rodo HBsAg serumo nebuvimą. Teigiamas rezultatas - HBsAg identifikavimas rodo ūminio virusinio hepatito B inkubaciją arba ūminį periodą, taip pat lėtinį virusinį hepatitą B.

    Antikūnai prieš hepatito B viruso JgG branduolinį antigeną (anti-HBcAg JgG)

    Paprastai serumo anti-HBcAg serume nėra.
    Pacientams, sergantiems anti-HBcAg JgG, pasireiškia ūminiu virusinio hepatito B laikotarpiu ir išlieka visą gyvenimą. Anti-HBcAg JgG yra pirmaujantis perduoto HBV žymuo.

    Diagnozuoti naudojami anti-HBcAg JgG kraujo tyrimai:

  • lėtinis virusinis hepatitas B, esant HBs antigenui serume;
  • virusinis hepatitas B.
  • Tyrimo rezultatų vertinimas

    Tyrimo rezultatas išreiškiamas kokybiškai - teigiamas arba neigiamas. Neigiamas rezultatas rodo, kad nėra anti-HBcAg JgG serumo. Teigiamas rezultatas - anti-HBcAg JgG nustatymas rodo ūminę infekciją, sveikimą arba anksčiau perduotą virusinį hepatitą B.

    Hepatito B viruso "e" antigenas (HBeAg)

    Paprastai HBeAg serume nėra.
    HBeAg galima rasti daugumos pacientų, sergančių ūminiu virusiniu hepatitu B, serume. Jis paprastai išnyksta kraujyje prieš HBs antigeną. Didelis HBeAg kiekis per pirmąsias ligos savaites arba jo aptikimas ilgiau nei 8 savaites suteikia pagrindo įtarti lėtinę infekciją.

    Šis antigenas dažnai aptinkamas lėtiniu virusiniu etiologijos hepatitu. Ypač domina HBeAg apibrėžimas yra tai, kad jo aptikimas apibūdina aktyvią replikacinę infekcijos proceso fazę. Nustatyta, kad didelės HBeAg koncentracijos atitinka aukštą DNR polimerazės aktyvumą ir apibūdina aktyvią viruso replikaciją.

    HBeAg buvimas kraujyje rodo, kad jis yra didelis infekciškumas, t.y. aktyvaus hepatito B infekcijos buvimas tiriamame organizme ir aptinkamas tik esant HBs antigenui kraujyje. Pacientams, sergantiems lėtiniu aktyviu hepatitu, antivirusiniai vaistai vartojami tik tada, kai HBeAg nustatomas kraujyje. HBeAg - antigenas - hepatito B viruso ūminės fazės ir replikacijos žymuo.

    Nustatant HBe antigeną, tiriamas kraujo tyrimas:

  • virusinio hepatito B inkubacinis laikotarpis;
  • virusinio hepatito B prodrominis laikotarpis;
  • ūminis virusinio hepatito B laikotarpis;
  • lėtinis patvarus virusinis hepatitas B.
  • Tyrimo rezultatų vertinimas

    Tyrimo rezultatas išreiškiamas kokybiškai - teigiamas arba neigiamas. Neigiamas rezultatas rodo HBeAg serumo nebuvimą. Teigiamas rezultatas - HBeAg nustatymas rodo ūminio virusinio hepatito B inkubaciją arba ūminį periodą arba tęstinį viruso replikavimą ir paciento infekcinį poveikį.

    Antikūnai hepatito B viruso antigenui "e" (anti-HBeAg)

    Anti-HBeAg serume paprastai nėra. Anti-HBeAg antikūnų atsiradimas paprastai rodo intensyvų hepatito B viruso pašalinimą iš organizmo ir nedidelę paciento infekciją.

    Šie antikūnai pasireiškia ūminiu laikotarpiu ir išlieka iki 5 metų po infekcijos. Lėtinio patvaraus hepatito atveju anti-HBeAg randamas paciento kraujyje kartu su HBsAg. Serokonversija, t.y. HBeAg perėjimas prie anti-HBeAg su lėtiniu aktyviu hepatitu, dažniau prognozuojamas, tačiau tas pats serokonversija nepagerina sunkios cirozės kepenų transformacijos prognozės.

    Diagnozuojant virusinį hepatitą B, toliau išvardytais atvejais naudojami kraujo tyrimai dėl anti-HBeAg buvimo:

  • nustatant pradinį ligos etapą;
  • ūminė infekcija;
  • ankstyvas atkūrimas;
  • atgaivinimas;
  • vėlesnio etapo atkūrimas.
  • neseniai perduoto virusinio hepatito B diagnozė;
  • lėtinio patvaraus virusinio hepatito B diagnozė.
  • Tyrimo rezultatų vertinimas

    Tyrimo rezultatas išreiškiamas kokybiškai - teigiamas arba neigiamas. Neigiamas rezultatas rodo, kad serume nėra antikūnų prieš HBeAg. Teigiamas rezultatas yra antikūnų prieš HBeAg aptikimas, kuris gali rodyti pradinį ūminio virusinio hepatito B etapą, ūminį infekcijos laikotarpį, ankstyvą atkūrimo stadiją, sveikimą, neseniai perduotą virusinį hepatitą B arba nuolatinį virusinį hepatitą B.

    Lėtinio B hepatito buvimo kriterijai yra šie:

  • aptikti arba periodiškai aptikti HBV DNR kraujyje;
  • nuolatinis arba periodinis ALT / AST aktyvumo padidėjimas kraujyje; t
  • lėtinio hepatito morfologiniai požymiai, atliekant histologinį kepenų biopsijos tyrimą.
  • B hepatito viruso nustatymas pagal PGR (kokybiškai)

    Paprastai nėra hepatito B viruso kraujyje.
    Kokybinis hepatito B viruso nustatymas pagal PCR metodą kraujyje leidžia patvirtinti viruso buvimą paciento organizme ir taip nustatyti ligos etiologiją.

    Šiame tyrime pateikiama naudinga informacija apie ūminio virusinio hepatito B diagnozavimą ligos inkubaciniame ir ankstyvajame vystymosi etape, kai gali nebūti paciento pagrindinių serologinių žymenų kraujyje. Serumo viruso DNR aptinkama 50% pacientų be HBeAg. PCR metodo analitinis jautrumas yra ne mažesnis kaip 80 virusų dalelių 5 μl, paskutinis DNR aptikimo mėginys, specifiškumas - 98%.

    Šis metodas yra svarbus diagnozuojant ir stebint lėtinę HBV. Maždaug 5–10 proc. Cirozės ir kitų lėtinių kepenų ligų atvejų sukelia lėtinis hepatito B viruso nešiklis. Tokių ligų aktyvumo žymenys yra HBeAg ir hepatito B viruso DNR buvimas kraujyje.

    PGR metodu galima nustatyti hepatito B viruso DNR kiekybiškai ir kokybiškai. Nustatytas fragmentas abiem atvejais yra hepatito B viruso struktūrinio baltymo geno unikali DNR seka.

    B hepatito viruso DNR nustatymas biomaterialioje medžiagoje, naudojant PCR, yra būtinas:

  • abejotinų serologinių tyrimų rezultatų sprendimas;
  • ūminės ligos stadijos nustatymas, palyginti su ankstesne infekcija ar kontaktu;
  • kontroliuoti antivirusinio gydymo veiksmingumą.
  • B hepatito DNR išnykimas iš kraujo yra gydymo veiksmingumo požymis

    B hepatito viruso nustatymas pagal PGR (kiekybinis)

    Šis metodas suteikia svarbią informaciją apie ligos išsivystymo intensyvumą, gydymo veiksmingumą ir atsparumo aktyviems vaistams vystymą.
    Nustatant viruso hepatitą PCR serume, naudojamos bandymo sistemos, kurių jautrumas mėginyje yra 50–100 kopijų, o tai leidžia aptikti 5 x 10 ^ 3 -10 ^ 4 kopijų / ml koncentraciją. PCR viruso hepatito B atveju būtinai reikalingas sprendžiant viruso replikaciją.

    Serumo viruso DNR aptinkama 50% pacientų be HBeAg. Kraujo serumas, limfocitai ir hepatobiopija gali būti medžiaga, skirta aptikti hepatito B viruso DNR.

    • Viremijos lygio įvertinimas yra toks:
    • mažiau nei 2,10 ^ 5 kopijų / ml (mažesnė nei 2,10 ^ 5 TV / ml) - maža viremija;
    • nuo 2,10 ^ 5 kopijų / ml (2,10 ^ 5 TV / ml) iki 2,10 ^ 6 kopijų / ml (8,10 ^ 5 TV / ml) - vidutinė viremija;
    • daugiau kaip 2,10 ^ 6 kopijų / ml - didelė viremija.

    Yra ryšys tarp ūminio virusinio hepatito B ir HBV DNR koncentracijos paciento kraujyje. Su mažu viremijos lygiu infekcijos chronizacijos procesas yra artimas nuliui, vidutinis procesas yra chronizuotas 25-30% pacientų, o esant aukštam viremijos lygiui, ūminis virusinis hepatitas B dažniausiai tampa lėtinis.

    Lėtinės HBV interferono alfa gydymo indikacijos turėtų būti laikomos aktyvaus viruso replikacijos žymenimis (HBV HBV, HBeAg ir HBV DNR nustatymas kraujo serume per praėjusius 6 mėnesius).

    Gydymo veiksmingumo vertinimo kriterijai yra HBEAg ir HBV DNR išnykimas kraujyje, kuris paprastai būna normalizuotas transaminazių kiekis ir ilgalaikis ligos atleidimas, HBV DNR išnyksta iš kraujo iki penktojo gydymo mėnesio 80% pacientų. Viremijos lygio sumažinimas 85% ar daugiau iki trečiosios dienos nuo gydymo pradžios, lyginant su pradiniu, yra greitas ir gana tikslus kriterijus, kaip prognozuoti terapijos veiksmingumą.

    Hepatito B PCR analizė

    Hepadnaviridae šeimos DNR virusas yra tiesioginis hepatito B sukėlėjas. B hepatito PCR analizė leidžia aptikti užkrėstą DNR virusą paciento kraujyje. Teigiamo tipo HBV DNR rezultatas rodo infekcijos buvimą paciento kraujyje. Pažymėtina, kad naudojant PCR analizę diagnozė leidžia nustatyti ne tik infekcijos buvimą, bet ir jo kiekybinę apkrovą bei aktyvumą. Šis metodas yra patikimas, tikslus ir atkuriamas. HBV DNR kiekio nustatymas su qPCR gali būti naudojamas HBV terapijos veiksmingumui stebėti ir naudingas supratimui apie natūralią HBV istoriją endeminėje srityje.

    B hepatito užsikrėtimo procesas vyksta per naminius ar seksualinius kontaktus - tiesiogiai kontaktuojant su užkrėstu krauju. Po infekcijos virusas patenka į kepenų ląsteles, kuriose jis toliau aktyviai dauginasi. Per kraujotaką patogeninės ląstelės plinta visame kūne. Verta pažymėti, kad hepatito B ląstelės yra labai atsparios rūgščiai ir aukštai temperatūrai. Jis gali išlaikyti savo žalingas savybes šešis mėnesius.

    B hepatito PGR tipai

    Iki šiol yra nustatyta dviejų tipų diagnostika, jei įtariate, kad yra hepatito B virusas: kokybinis PCR (leidžia nustatyti 100% viruso buvimo kraujyje tikslumą) ir kiekybinę PCR (leidžia nustatyti viruso aktyvumo laipsnį).

    Jei įtariama, kad yra HBV infekcija, skiriamas aukštos kokybės PGR, arba jei kiti diagnostiniai metodai nesukėlė aiškių rezultatų. Šio tipo PCR analizė yra labai paprasta iššifruoti: neigiamas (nėra viruso aptinkamas kraujyje), teigiamas (virusas aptinkamas kraujyje). Pagrindinis kokybinės analizės uždavinys yra nustatyti infekuotų ląstelių buvimą ligos pradžioje. Jei virusas buvo diagnozuotas praėjus dviem savaitėms po tariamos infekcijos, gydymo veiksmingumas bus daug didesnis. Jei virusas kraujyje yra apie du mėnesius, liga tampa lėtinė, todėl negali būti visiškai išgydoma.

    Jei kokybinė diagnozė patvirtina HBV buvimą kraujyje, gydytojas nustato kiekybinę analizę.

    Kiekybinė analizė leidžia nustatyti viruso vystymosi aktyvumą paciento organizme. Šis PGR analizės tipas priskiriamas:

    • nustatyti ligos stadiją;
    • stebėti taikomo gydymo veiksmingumą;
    • nustatyti viruso atsparumo tam tikram vaistui lygį;
    • narkotikų atrankai.

    Kiekybiniai viruso rodikliai kraujyje matuojami TV / ml arba DNR mililitre.

    Jei gydytojas iš karto nustato kiekybinę diagnozę, nekontroliuodamas kokybės, tai yra 75 TV / ml. Jei aptinkama mažiau tarptautinių vienetų, rezultatas yra tas, kad HBV nėra aptinkamas, kai skaičiai viršija normalų, diagnozuojamas viruso hepatito B buvimas.

    Kiekybinės diagnostikos interpretavimas

    B hepatito atveju CRP norma laikoma šiais rodikliais (kopijomis / mililitrais): mažiau nei 10 3 - neaktyvus virusas; nuo 10 4 iki 10 5 - virusas paprastai yra neaktyvus; 10 - aktyvus virusas; 10 - virusas aukšto lygio veikloje.

    Remiantis kiekybiniais rodikliais, 100% tikslumu galima nustatyti ligos formą (nešiklis, ūminis ar lėtinis), viruso reakciją į gydymą, papildomos diagnostikos poreikį.

    Lėtinė hepatito B forma nustatoma, jei viruso aktyvumas yra 10,5 kopijų mililitre. Krovinys diagnozuojamas, jei balai yra mažesni nei 10 5 kopijų mililitre.

    Gydymo laikotarpiu būtina reguliariai (kartą per tris mėnesius) kartoti kiekybinę diagnostiką, kad būtų atsižvelgta į laiką, kai virusas išsivysto imunitetu nuo naudojamų vaistų, ir pakeisti metodą. Jei visi tyrimai buvo atlikti teisingai ir pasirinktas veiksmingas gydymas, pakartotinė analizė (po trijų gydymo dienų) parodys patogeninių ląstelių aktyvumo mažėjimą ne mažiau kaip aštuoniasdešimt penkių procentų.

    Kepenų biopsija atliekama tik tuo atveju, kai šešių mėnesių gydymo laikotarpis parodė, kad ALT koncentracija yra dvigubai didesnė nei įprastai, o PCR diagnostika rodo mažesnius nei 10 5 kopijų viename mililitre kraujo.

    Pasirengimas apklausai

    Analizei reikalingas veninis kraujas. Norint gauti kuo tikslesnius rezultatus, būtina pasirengti procedūrai: atsisakyti maistą ne mažiau kaip aštuonias valandas iki kraujo surinkimo; dvi dienas atsisakyti gydymo vaistais (būtina įspėti gydytoją apie vaistų vartojimą); prieš dovanodami kraują, turite praleisti dvidešimt minučių poilsio režimu; Prieš dvylika valandų iki procedūros atsisakykite sporto pratimų, alkoholinių gėrimų, rūkymo ir riebaus maisto.

    Svarbu: jei diagnozė yra reikalinga vaikui iki penkių mėnesių, jis turi duoti stiklinę virinto vandens kas dešimt minučių šešiasdešimt minučių iki kraujo surinkimo procedūros.

    Apibendrinimas

    Šiandien hepatito B PCR analizė yra tiksliausias viruso diagnozavimo metodas. Šis metodas leidžia nustatyti mutuojamas ir paslėptas ligos formas, diagnozuoti ligą pirmosiomis infekcijos dienomis, todėl pasirinkti efektyviausią gydymą. Laboratorijos padėjėjas lygina analizės rezultatus su norma, o po to juos užbaigia. Duomenys tvarkomi per dvi savaites. Norint gauti kreipimąsi į PCR analizę, būtina susisiekti su hepatologu, infekcinės ligos specialistu arba virusologu. Svarbu prisiminti, kad kuo greičiau pateksite į gydytoją, tuo greičiau bus gauti rezultatai, todėl kuo veiksmingesnis gydymas.

    PGR ir biocheminės hepatito analizės paaiškinimas

    Hepatitas yra kepenų uždegimo procesas, kurį sukelia toksinių medžiagų ląstelių naikinimas. Dėl hepatito analizės iššifravimo galima objektyviai įvertinti paciento, kenčiančio nuo kepenų ligos, sveikatos būklę. Infekcinių ligų gydytojas pasakys, kaip suprasti tyrimo rezultatus ir paskirti tolesnį gydymą. Pacientas, savarankiškai išnagrinėjęs gautus duomenis, daro tam tikras išvadas, kurios ne visada atitinka tikrovę.

    Hepatito B virusas yra serume ir specifiniai laboratoriniai diagnostikos metodai leidžia nustatyti patogenų antigenus ir antikūnus.

    Hepatito tyrimų sąrašas

    Kepenų virusinio uždegimo diagnozę patvirtina specialūs tyrimai. Prieš pradedant gydymą, pacientas išbandomas:

    1. Pacientas teikia kraują tyrimams ryte, nuo 7 iki 9 val. Pacientas turi susilaikyti nuo 12 val. Kiekybinė hepatito B analizė lemia viruso buvimą ir antikūnų titrą serume. Tuo pačiu metu gydytojas nurodo tyrimą, kuris identifikuoja HBV DNR, naudojant PCR reakcijas.
    2. Infekuotiems pacientams nustatomas anti-HBc IgG baltymo ir HBsAg antigeno buvimas. Specifinis imunoglobulinas rodo spartų hepatito viruso koncentracijos padidėjimą paciento serume. Jei yra neigiamas Anti-HBc testas, IgG atliekamas papildomas kitų ligų buvimo tyrimas.
    3. Tiriant ligos paūmėjimo laikotarpį, jie nustato HBeAg ir Anti-HBc IgM imunoglobulinus. Teisingos diagnozės nustatymas galimas tik po to, kai aptinkamas virusinės RNR - hepatitas šiuo atveju patvirtinamas molekuliniu-biologiniu metodu.
    4. PCR plačiai naudojamas kepenų ligos diagnozei - kiekybinis metodas leidžia Jums skirti veiksmingą hepatito gydymą.

    Imunologinis tyrimas

    Siekiant nustatyti paciento gebėjimą susidoroti su pavojingu virusu, diagnozuoti kūno atsparumo lygį. Dėl viso laboratorinių tyrimų komplekso nustatomi kiekybiniai ir kokybiniai imunologinių veiksnių rodikliai - antikūnai prieš hepatitą B.

    HBsAg baltymas yra paviršinis antigenas, kuris yra patogeno superkapsido (viruso apvalkalo) komponentas. Jos pagrindinė funkcija yra dalyvavimas sveikų kepenų ląstelių virusų adsorbcijos procese. HBsAg peptidas yra atsparus aplinkos veiksniams - šarmams (Ph = 10), 2% chloramino ir fenolio tirpalui.

    HBsAg žymeklis yra infekuoto asmens serume. Iškart po jo išvaizdos RNR ne tik paverčia savo sintezę, bet taip pat turi ankstesnės žymeklio pagrindines Ar daleles. Tai įrodo aktyvios hepatito fazės vystymąsi.

    HBeAg buvimas lėtiniame paciente rodo, kad prasideda aktyvus infekcinio proceso etapas.

    Anti-HBc žymeklis yra dviejų tipų antikūnai - IgG ir IgM. Tai yra baltymas, būdingas vienam antigenui. Ūminė ligos forma būdinga Anti-HBc ir IgM. Jų teigiama vertė rodo ankstesnę kepenų ligą.

    Kiekybinė analizė

    Patogeno aktyvumui nustatyti nustatyti PCR analizę. Jis nustato viruso apkrovos lygį ir paciento atsigavimo galimybes. Polimerazės grandininė reakcija atliekama pasibaigus latentiniam laikotarpiui. Tyrimo procese nustatomas ne tik HBsAg, bet ir HBeAg žymeklis.

    Dekoduojant hepatito PCR analizę, galite nustatyti patologinio proceso aktyvumo laipsnį ir kompleksinės terapijos veiksmingumą.

    Gydytojas nustato, kaip jautrūs paciento kūnas yra antivirusiniai vaistai, ir ar galima imtis priemonių lėtinės kepenų ligos priežastims pašalinti. Tokiu atveju transaminazių indeksas didėja, o priežastinio poveikio aktyvumo indeksas yra kelis kartus didesnis nei normalus indeksas, o aminorūgščių koncentracija yra daugiau kaip 106 DNR kopijų ml.

    Kraujo transaminazių norma atitinka fermentų AsAT ir AlAT reikšmes. Alanino aminotransferazė moterims neviršija 32 V / l, o vyrams - 40 V / l. Viruso koncentracija žmonėms, užsikrėtusiems ankstyvame amžiuje, yra 100 000 kopijų / ml.

    Neaktyvioje viruso fazėje ir Anti-HBc atveju HBV DNR yra nuo 2000 TV / ml, o kopijų skaičius neviršija 10 000.

    Molekulinis hibridizacijos metodas

    ELISA atsakas į hepatitą lemia antigeno tipą su antikūnais ir fermentais. Pakopiniai tyrimai yra priimtini, bet tik specialistas, gavęs analizės rezultatą laiku, gali atlikti tinkamą diagnozę.

    Viruso hepatito žymenys imunologinio tyrimo metu yra HBsAg, Anti-Hbcor IgM. Pradėjus ligą, jie padidėja: PPBR-1,55, OPcr-0,27, HBsAg yra 1,239, viruso DNR nenustatyta. Po gydymo analizės rezultatai rodo, kad HBsAg sumažėja iki 1,07, o HBeAg tampa neigiamas. Yra viruso DNR.

    Jei gaunamos neigiamos IgM, IgG, IgA vertės, būtina nustatyti, ar liga nėra, ar visiškai atsigavo.

    Teigiama IgG reikšmė rodo visiškai suformuotą imunitetą. Šiuo atveju IgM nėra aptinkamas. Svarbu žinoti, kad hepatito tyrimas atskleidžia aukštą IgM titrą.

    Ūminiu ligos laikotarpiu pasirodo neigiamos IgG vertės. Virusinės ligos atleidimą lydi neigiamas imunoglobulino IgM. ELISA yra gana paprasta ir saugi paciento sveikatai.

    Biocheminis kraujo tyrimas

    Serumo tyrimas identifikuoja patologiją organizme, nurodo diagnozę, leidžia įvertinti kepenų darbą ir gauti informacijos apie metabolizmą. Biocheminė analizė atliekama ryte. Tyrimams naudojant medžiagą, gautą iš veninio kraujo.

    Svarbu laikytis pasirengimo hepatito C tyrimams taisyklių - šiuo atveju visų rodiklių dekodavimas nebus iškreiptas. Bendras bilirubinas paprastai yra 8,55–20,2 mmol / l, o jo padidėjimas rodo kepenų ligos atsiradimą. Taip pat padidėja Alat ir AsAT reikšmės hepatito B atveju.

    Albuminas sveikam pacientui yra 35–55 g / l. Mažas plazmos baltymų kiekis rodo kepenų virusinį uždegimą.

    Normalus LDH indeksas yra 125–250 U / l, o jo augimas reiškia ligos organo ląstelių deformaciją ir sunaikinimą. LDH rodiklis (sorbitolio dehidrogenazė) rodo kepenų audinio būklę. Normalioji vertė yra 0–1 U / l. Augimo greitis yra būdingas ūminio B hepatito kurso ar perėjimo prie lėtinės stadijos komponentas.

    Baltymų GGG aktyvumas kraujo plazmoje yra mažas.

    Jo augimas stebimas kepenų uždegime ir išlieka ilgą laiką. Norma - 25–49 V / l vyrams, moterims šis rodiklis yra žymiai mažesnis - 15–32 U / l.

    Lėtinių hepatito B požymių dekodavimas

    Kepenų ligos žymeklių identifikavimas yra pagrindinis gydytojo uždavinys, kuris siekia užkirsti kelią klaidoms diagnozuoti. Svarbu žinoti, kad šie fiziologiniai veiksniai turi įtakos analizės rezultatui:

    Antigenų lentelė ir jų dekodavimas leis pacientui sužinoti apie ligos pobūdį.

    B hepatito PCR tipai ir rezultatų interpretavimas

    Polimerazės grandininė reakcija yra kraujo tyrimas, kuris gali tiksliai aptikti hepatito B virusą. Šio metodo bruožas yra tas, kad jis gali parodyti HBV ankstyvaisiais etapais - vieną mėnesį po infekcijos, o specifinis antigenas paciente aptinkamas tik po 2 mėnesių. PCR gali aptikti ne tik normalų DNR virusą, bet ir mutantines padermes, kurių jokia kita analizė nėra matoma.

    Dekoduojant hepatito B PCR, rezultatai lyginami su standartinėmis vertėmis. Remiantis tuo, daromos išvados apie ligos buvimą (teigiamas rezultatas), viruso koncentraciją (aktyvumą) arba ligos nebuvimą (neigiamas rezultatas). Duomenų apdorojimas yra 2 savaitės.

    PCR viruso hepatito B tipai

    Yra 2 diagnostikos tipai, skirti B hepatitui. Aukštos kokybės PCR leidžia 100% tikslumu pasakyti, ar HBV yra kraujyje, ar ne. Kiekybinis PCR rodo viruso aktyvumą, ty kiek HBV DNR yra 1 ml kraujo.

    Aukštos kokybės PGR ir jo aiškinimas

    Kraujo tyrimas dėl hepatito B PCR gali aptikti tik DNR fragmentų buvimą. Paskiriamas tuo atveju, kai pacientas įtaria HBV infekciją (HBV) arba kai kiti diagnozavimo metodai, pavyzdžiui, serologiniai tyrimai, neatsako. Rezultatų dekodavimas atliekant kokybinę analizę yra labai paprastas:

    • neigiamas rezultatas - nėra viruso;
    • teigiamas rezultatas - aptiktas virusas.

    Aukštos kokybės PCR tikslas yra patvirtinti arba paneigti hepatito B viruso buvimą, taip pat atlikti ankstyvą diagnozę. Jei HBV aptinkamas per 1-2 savaites po infekcijos, gydymas bus kuo veiksmingesnis. Aktyviai plėtojant HBV 2 mėnesius ir ilgiau, liga tampa lėtinė ir negali būti visiškai išgydoma.

    Tuo atveju, kai hepatito kokybišką PGR parodo virusas, kitas žingsnis yra atlikti kiekybinę diagnozę.

    Kiekybinis PGR

    Siekiant veiksmingai gydyti arba įvertinti gydymo rezultatus, nepakanka žinoti, kad pacientas turi HBV. Būtina kiekybiškai įvertinti hepatito B viruso DNR vertę 1 ml kraujo, ty viruso apkrovą ant kūno. Šis hepatito B PGR tipas atliekamas šiais atvejais:

    1. Prieš skiriant gydymą.
    2. Įvertinti gydymo efektyvumą.
    3. Nustatyti virusų atsparumo vartojamiems vaistams raidą.
    4. Nustatyti ligos stadiją.

    Viruso matavimo vienetas yra tarptautiniai vienetai (TV / ml) arba DNR kopijų skaičius / ml, ty DNR fragmentų skaičius 1 ml kraujo. Dviejų vienetų santykis priklauso nuo pasirinktos bandymo sistemos ir svyruoja nuo 2 iki 7 kopijų / ml 1 TV / ml. Jei sistema nežinoma, konversijai naudojama vidutinė vertė:

    1 TV / ml = 5 kopijos / ml

    Jei kiekybinė analizė atliekama nedelsiant, ribinė ligos diagnozavimo norma yra 75 TV / ml. Kai rezultatas yra didesnis už šį rodiklį, atliekama HBV diagnozė, žemiau - HBV nenustatyta.

    Kiekybinės PCR apdorojimas

    B hepatito atveju šios viruso apkrovos (viremijos) vertės, kopijos / ml, yra PCR standartai:

    • 10 ^ 5 kopijų / ml. Kai didelio virusinio aktyvumo atveju ALT lygis dažniau padidėja 2 kartus per šešis mėnesius, tada antivirusinis gydymas yra nedelsiant nustatytas.

    Norėdami sužinoti, kaip DNR hepatitas elgsis chronizacijos požiūriu, ty perėjimas prie lėtinės formos iš ūminio, taip pat naudojami PCR diagnostikos rezultatai:

    • HBV DNR 2 x 10 ^ 6 kopijų / ml reiškia, kad lėtinė ligos forma yra neišvengiama.

    Pasirengimas apklausai

    Norint nustatyti HBV buvimą pagal PGR, kraujas paimamas iš venų. Procedūra visada vykdoma griežtai skrandyje ir geriausia patekti į laboratoriją ryte, kai natūralus poilsio laikas yra 8 valandos. Kad tyrimo rezultatai būtų teisingi, turite iš anksto žinoti, kaip tinkamai pasiruošti klinikai. Papildomi veiksmai:

    1. Atsisakymas nuo riebaus maisto, rūkymo, alkoholio ir sporto 12 valandų iki procedūros.
    2. Prieš dovanodami kraują, pailsėkite 20 minučių.
    3. Prieš pradedant procedūrą, slaugytoja turi būti įspėta apie vartojamus vaistus.

    Dėmesio! Jei diagnozė atliekama iki 5 metų amžiaus vaikui, tada pusvalandį prieš procedūrą, jis turi gerti po 1 stiklinę virinto vandens kas 10 minučių.

    Apibendrinimas

    Iki šiol PGR diagnostika, skirta hepatito B nustatymui, yra pats tiksliausias metodas. Šis metodas leidžia matyti paslėptas ir mutuotas ligos formas, nustatyti ligas pirmosiomis savaitėmis po infekcijos ir atitinkamai atlikti veiksmingą gydymą. Priklausomai nuo situacijos, atliekamas kokybinis arba kiekybinis PGR, kurio tikslas yra aptikti HBV ir nustatyti jo aktyvumą. Norėdami išbandyti, turite susisiekti su virusologu, infekcinių ligų specialistu arba hepatologu.

    PGR hepatito ir jo rezultatų analizės esmė

    Virusinis hepatitas B sėkmingai gydomas, jei jis nustatomas laiku, ir teisingai nustatomas antikūnų ir antigenų skaičius paciento kraujyje. Naudojant hepatito fermento imunologinį tyrimą galima nustatyti virusų žymenų buvimą, tačiau jie negali nustatyti tikslaus proceso etapo.

    Kiekybiniam vertinimui naudojama PCR diagnostika. Naudojant testą, galima suskaičiuoti žymenų skaičių, numatyti ligos eigą ir tikimybę išgydyti antivirusinius vaistus.

    Pagrindinis šio tyrimo privalumas yra gebėjimas aptikti net minimalias viruso koncentracijas, identifikuoti patogeną rūšies stadijoje.

    B hepatito diagnostika

    Hepatito B virusas yra labai užkrečiamas ir atsparus išoriniam poveikiui. Jis keletą savaičių išlieka aktyvus paciento kraujyje. Todėl kiekvienas žmogus gali užsikrėsti, net jei pastebima profilaktika.

    Diagnozuoti ligą nustatyti šiuos tyrimus:

    PGR metodo esmė

    Amerikos chemikas K.Mullis gavo Nobelio premiją, o jo diagnostikos metodas vis dar naudojamas.

    PCR metodo protėviai (polimerazės grandininė reakcija) laikomi Norvegijos mokslininku H. Kleppe. Jis pirmiausia pradėjo atlikti DNR amplifikaciją (atkūrimą), naudojant trumpą DNR grandinę, ty sintetinį pradmenį (kopiją).

    Tačiau mokslininkas nesuvokė savo idėjos. Panašius tyrimus atliko amerikiečių chemikas K.Mullis, kuris 1993 m. Buvo apdovanotas Nobelio premija už savo išradimą. Nuo tada PCR buvo naudojamas nustatyti tėvystę, diagnozuoti genetines ligas ir aptikti virusus.

    Reakcijos esmė yra ta, kad naudojant fermentus kopijuojamas tam tikras DNR gabalas. Galite nukopijuoti tik tą plotą, kuris atitinka nurodytus parametrus ir jei jis yra pateiktame pavyzdyje. Reakcijai pradėti naudojami šie komponentai:

    1. Matricos DNR su nukopijuojama svetaine.
    2. Gruntai, panašūs į struktūrą su DNR.
    3. Polimerazė, ty fermentas, kuris sukelia reakciją. Jis turėtų būti termostabilus, t. Y. Išlaikyti ekstremalias temperatūras.
    4. Sprendimas su tam tikrais parametrais, užtikrinant reakcijos eigą.

    Reakcija atliekama keliais etapais:

    B hepatito aptikimui naudojamos dvi reakcijos rūšys: kiekybinė ir kokybinė.

    Kiekybinis PGR

    Kiekybinis metodas lemia HBV genomo kiekį

    Kiekybinis PCR apima vienalaikį DNR fragmentų kopijų kūrimą ir molekulių skaičiaus nustatymą. Matavimas atliekamas po kiekvieno etapo, ty realiu laiku. Tai pasiekiama naudojant fluorescentinius zondus, kurie yra įtraukti į molekulių grandinę ir šviečia per tam tikrą tyrimo laikotarpį.

    Šis metodas naudojamas aptikti DNR fragmentus, kurie yra hepatito viruso žymenys. Naudojant kiekybinį metodą, galima tiksliai išskirti viruso genotipą. Kitaip tariant, apskaičiuojamas HBV genomo kopijų skaičius paciento ląstelių skaičiumi.

    Kiekybinė analizė suteikia atsakymus į šiuos klausimus:

    1. Kokiu intensyvumu liga progresuoja.
    2. Kaip veiksmingas gydymas.
    3. Ar atsirado atsparumas vaistams?

    Taip pat būtina atlikti kiekybinį matavimą lėtinės infekcijos stadijos diagnostikai. Jei DNR kiekis yra mažesnis nei 100 vnt / ml normalaus transaminazės lygio, asmuo yra viruso nešiklis.

    Ūminėje fazėje antikūnų kiekis yra daug didesnis, o antivirusinio gydymo metu antikūnų skaičiaus padidėjimas rodo atsparumą vaistams, o tai yra signalas gydymui koreguoti.

    Aukštos kokybės PGR

    Aukštos kokybės PCR suteikia mažiau informacijos, bet gali pašalinti infekciją.

    Aukštos kokybės PCR gali nustatyti tik patogeno buvimą kraujyje. Jei jų nėra, pacientas nėra užsikrėtęs, jei patogenas patenka į kraują, rezultatas bus teigiamas.

    Tačiau naudojant kokybinę reakciją neįmanoma išsiaiškinti viruso genomo, ligos stadijos. Todėl HBV diagnozei atlikti buvo atlikti kiekybiniai ir kokybiniai matavimai.

    Pasirengimas apklausai

    PCR analizei reikalingas veninis kraujas. Tai turi būti daroma ryte tuščiu skrandžiu.

    Pacientas turi tinkamai pasirengti tyrimui:

    1. 10 valandų atsisakyti maisto, galite gerti tik švarų vandenį.
    2. Nustojus vartoti alkoholio, prieš 4 val.
    3. Prieš tyrimą reikėtų vengti fizinio ir emocinio streso.
    4. Nustokite vartoti vaistus 2 dienas, jei tai neįmanoma, būtina apie tai pranešti laboratorijos technikui. Kai kurie vaistai turi poveikį galutiniam rezultatui.

    Duomenų aiškinimas

    Kiekybinėje reakcijoje gauti rodikliai vertinami priklausomai nuo DNR kopijų skaičiaus.

    Kokybės matavimo duomenis lengva interpretuoti. Jis pateikia teigiamą arba neigiamą atsakymą.

    Kiekybinėje reakcijoje galima įvertinti gautus rodiklius, priklausomai nuo DNR kopijų skaičiaus. Matavimo vienetas yra kopijos / ml.

    Duomenys dekoduojami taip:

    1. Jei HBV DNR kiekis yra mažesnis nei 90, infekcija nėra. Pacientas išsivystė po skiepijimo imunitetu arba buvo išgydytas nuo ligos.
    2. Kai kopijų skaičius 2x100 kalba apie viruso nešiklį.
    3. Numeris 2x106 rodo lėtinę ligos stadiją.
    4. Kai DNR yra daugiau nei 2x109, pacientas turi ūminį hepatito stadiją.

    Klaidingi rezultatai

    Diagnostinio metodo privalumai, naudojant polimerazės reakcijas, yra tokie:

    1. Tiesioginis ligų sukėlėjų aptikimas. Priešingai, ELISA pateikia informaciją apie viruso antikūnų buvimą.
    2. Specifiškumas. Tai yra, tai yra DNR regionas, kuris yra kopijuojamos biomaterijos mėginyje.
    3. Padidėjęs jautrumas. Šis metodas netgi gali aptikti atskirų ląstelių fragmentus.
    4. Diagnozė ligoms ūminiais ir latentiniais etapais. Tai reiškia, kad galima diagnozuoti ligą ikiklinikinių apraiškų etape.

    Metodas turi trūkumų, dėl kurių gaunami klaidingi rezultatai. Svarbiausias trūkumas yra medžiagos užteršimo tikimybė. Pagrindinis užteršimo šaltinis yra prastai apdoroti mėgintuvėliai, laboratoriniai rankos, reagentai.

    Dalis ankstesnės reakcijos DNR gali patekti į kraują. Todėl laboratorijoms taikomi griežtesni sanitariniai reikalavimai: atskiri kambariai, plastikiniai vamzdžiai, laboratorijų ultravioletinis apdorojimas ir kt.

    Netinkami neigiami rezultatai gali būti susiję su sumažėjusiu reakcijos jautrumu. Taip atsitinka tokiais atvejais:

    • pacientas vartoja vaistus, pavyzdžiui, antikoaguliantus;
    • asmuo prieš fizinį krūvį patyrė fizinį stresą (sportuodamas, sunkus darbas);
    • infekcija neseniai.

    Jei pacientas turi didelę infekcijos tikimybę, o tyrimo rezultatas yra neigiamas, jis turi būti iš naujo išnagrinėtas.

    Taip pat žiūrėkite:

    Išvada

    Polimerazės grandinės reakcijos metodas yra pagrindinis ir informatyviausias HBV diagnozei. Tai leidžia ne tik nustatyti infekcijos nešiotojo statusą, bet ir išsiaiškinti ligos stadiją, įvertinti gydymo rezultatus.

    Siekiant tikslesnės diagnozės, naudojamas kokybinis ir kiekybinis matavimas. Šio metodo trūkumai yra taršos tikimybė, sumažėjęs jautrumas ir gana didelė kaina.

    Siekiant, kad rezultatai būtų patikimiausi, reikia tinkamai pasirengti tyrimui ir atlikti jį klinikoje su atitinkama licencija ir gera reputacija.

    Hepatito B DNR ir PGR

    DNR testai ir hepatito B viruso PCR yra jautriausi tyrimai, nustatantys molekulinės DNR pėdsakus kepenyse, kurie nustato viruso buvimą. Šio metodo esmė - daugkartinis DNR fragmento, priklausančio ligos sukėlėjui, kopijavimas.

    Hepatito B tipo PCR yra išorinio cheminio reagento su tiriama biologine medžiaga polimerazės grandininė reakcija, skirta nustatyti viruso DNR molekules kraujyje ir jų kiekybinius rodiklius vieneto tūriui. Analizė priskiriama šiais atvejais:

    • jei pacientui pasireiškia hepatito B požymiai;
    • diagnozuojant mišrią hepatitą;
    • paaiškinti gydymo veiksmingumą.

    PCR analizei surenkamas veninis kraujas. Prieš tyrimą turėtumėte susilaikyti nuo maždaug 8 valandų valgymo.

    Nustatant, kad virusas aptinka DNR, laikoma, kad normalus rezultatas nėra „aptiktas“. Tai reiškia, kad virusas nėra kraujo arba jo kiekis yra nereikšmingas. Galutinę diagnozę gali atlikti tik specialistas, remdamasis išsamia B tipo hepatito kraujo plazmos biocheminiu ir imunologiniu tyrimu, kurį gydytojas skiria. Savęs gydymas susijęs su per daug rizika.

    Venų kraujo mėginiai imami PCR analizei.

    PCR metodas leidžia aptikti patogeno DNR net ir esant minimaliam buvimui pasirinkto kraujo mėginyje. Be to, analizė leidžia nustatyti antigenus, kurie jau sukurti virusui. Kiekvienas antigenas nurodo konkretų ligos etapą:

    • HBsAg - šiuo metu virusas yra.
    • Anti-HBcor - patogenas šiuo metu nėra, tačiau buvo praeityje.
    • Anti-HBs - kraujyje yra antikūnų prieš hepatitą B (kaip alternatyva - herpes, ŽIV, chlamidijos, mikoplazmozė, kandidozė, tuberkuliozė, erkių encefalitas ir daug kitų ligų).

    Patologija ir jos požymiai

    Hepatitas B arba HBV yra virusinė infekcija, kuri veikia kepenų ląsteles. Tai yra pavojinga ne tik tiesioginiu veiksmu dėl organo parenchimos, kuri silpnina barjero funkciją ir bendrą imunitetą. Galima rimtesnių pasekmių, pvz., Kepenų cirozė ir piktybinių navikų atsiradimas.

    HBV perduodamas per hepatitu užsikrėtusio žmogaus kraują, jo ekskrementus, kontaktuojant su gleivine, ypač lytinių santykių metu, odos pažeidimus, per sterilius švirkštus kraujo perpylimo metu arba pilvo operacijų metu. Naujagimiui gali būti užsikrėtę jo serga motina, kai ji liečia jos spenius.

    B hepatitui būdingi šie simptomai:

    Neįprastas nuovargis

    • didėjantis nuovargis esant mažoms apkrovoms;
    • neįprastas nuovargis;
    • sunkumas dešinėje hipochondrijoje;
    • sumažėjęs apetitas, pykinimas;
    • odos geltonumas, akių sklera;
    • šviesios išmatos;
    • tamsus šlapimas;
    • skausmas sąnariuose.

    Inkubacinis laikotarpis, po kurio atsiranda šie simptomai, yra nuo vieno iki šešių mėnesių. Tai yra virusų ląstelių kaupimosi kepenų kraujyje laikotarpis. Kai jų koncentracija pasiekia kritinę masę, virusas persipina per hepatocitų membranas ir toliau dauginasi ląstelių viduje. Dėl šios priežasties kepenų ląstelės miršta, atsiranda cirozė, kuri, jei nėra tinkamų gydymo priemonių, sukelia mirtį. Laiku atliktas kraujo tyrimas, skirtas PCR ir hepatito B DNR, padeda išvengti neigiamų.

    PCR indikacijos yra:

    • teigiamas DNR tyrimas, patvirtinantis hepatito B diagnozę;
    • ūminis ir lėtinis hepatitas;
    • mišrus hepatitas;
    • kiekybinis viruso nustatymas kraujo serume;
    • veiksmingos terapijos taktikos plėtra.

    Pasirengimas analizei

    Pasiruošimą diagnozei, naudojant PCR, lemia biomedžiagos tipas. Taigi kraujas ir šlapimas dovanoja tik ryte, esant tuščiam skrandžiui. Taip pat buvo imtasi tepalų ir įbrėžimų iš urogenitalinės zonos. Vienintelis apribojimas moterims yra menstruacijos. Mokslinių tyrimų išvakarėse abiejų lyčių lytis yra ribota.

    PCR rezultatai gali būti laikomi patikimais tik tuo atveju, jei pacientas yra tinkamai pasirengęs procedūrai. Šis tyrimas reiškia šias sąlygas:

    • pilnas dvasinio komforto, jokio jaudulio nebuvimas. Siekiant užtikrinti, kad ši analizė būtų atlikta net namuose. Būtina kreiptis tik į gydytoją su atitinkama įranga;
    • mažiausiai 8-12 valandų prieš analizę susilaikius nuo maisto, alkoholio, rūkymo, fizinio aktyvumo, kitaip bus iškreipti tyrimų duomenys;
    • 15-20 minučių visiškai atsipalaiduoti prieš kraują;
    • nutraukus vaistus (jei tai neįmanoma, reikia įspėti laboratoriją);
    • vaikai iki penkerių metų, prieš pusę valandos prieš analizę, turėtų būti duodami virti vandeniu gerti mažomis porcijomis.

    Kaip tyrimas

    PCR analizė grindžiama molekulinės biologijos principais. Jie susideda iš specialių fermentų, kurie išskirsto ir replikuoja DNR ir RNR infekcinio agento, kuris randamas kraujyje, naudojimą. Po šios operacijos gautus mėginius identifikuoja laboratorijoje esanti duomenų bazė. Tuo pačiu metu aptinkama infekcijos rūšis ir koncentracija patogeno kraujyje.

    Tyrimui naudojamas stiprintuvas - termostatas, galintis šildyti ir vėsinti vamzdžius su biomedžiaga. Tai būtina norint aktyvuoti replikacijos procesus. Analizės tikslumas priklauso nuo temperatūros parametrų tikslumo.

    Dekodavimo rezultatai

    Teigiamas rezultatas pacientui yra laboratorinė išvada „nenustatyta“. Tai reiškia, kad kraujyje nėra hepatito B DNR, o skaitiniu požiūriu tai yra apie 120 TV / ml arba 200 kopijų per tą patį kraujo tūrio vienetą. Ši vertė yra norma. Reikalavimas dėl biologinės medžiagos yra tai, kad jis neturėtų būti užterštas.

    Kitų analizės rezultatų dekodavimas leidžia atlikti šias diagnozes:

    • Hepatito B DNR koncentracija kraujyje yra daugiau nei 200 kopijų, bet mažesnė už kritinį lygį. Nėra sunkios patologijos.
    • Viremija lengva forma, iki 500 kopijų viename ml. Gydymo pasirinkimas priklauso nuo kepenų biopsijos rodiklių ir jo funkcijos pablogėjimo laipsnio.
    • Padidėjusi viruso koncentracija (daugiau nei 500 kopijų / ml). Uždegiminis procesas aktyvioje fazėje ir reikalingas intensyvus antivirusinis gydymas.
    • Didžiausia viruso apkrova (daugiau kaip 800 kopijų viename mililitre). Terapinės priemonės yra parengtos atsižvelgiant į paciento būklę ir yra visiškai skirtos maksimaliam pagerinimui.
    Pacientui geras rezultatas yra išvada "nenustatyta"

    Nustatant hepatito B DNR kiekio kiekybinius rodiklius PCR metu, remiamasi terapiniu būdu. Po trijų ar šešių mėnesių bandymai dar kartą atliekami siekiant patikrinti antivirusinio gydymo veiksmingumą.

    Polimerazės grandinės reakcijos funkcija

    PCR metode naudojami du viruso nustatymo metodai: kokybinis ir kiekybinis.

    Kokybinis metodas patvirtina arba paneigia hepatito B buvimą. Paciento prašymu nustatyta, kad PCR yra užsikrėtęs, kad jis yra užsikrėtęs HBV infekcija arba kai ankstyva diagnozė nesuteikia vienareikšmių rezultatų jokiu kitu būdu.

    Jei hepatito B virusas gali būti aptiktas ne vėliau kaip po dviejų savaičių nuo patekimo į organizmą, tikėtina, kad gydymas yra teigiamas. Ateityje liga prasidės. Po maždaug dviejų mėnesių ji pateks į lėtinę fazę. Šiuo atveju visiškas gydymas taps neįmanomas.

    Kiekybinis požiūris į PCR naudojamas tik tada, kai aptinkamas virusas. Jis vertina:

    • specifinė viruso apkrova kepenyse;
    • ligos progresavimo intensyvumas;
    • atsparumas antivirusiniams vaistams;
    • gydymo veiksmingumą.

    Šie rodikliai turi tiesioginę praktinę reikšmę. Ypač kiekybinis DNR rodiklis. Ūminės hepatito B fazės prognozė priklauso nuo viruso koncentracijos kepenų kraujyje, todėl maža virusinių ląstelių koncentracija beveik visiškai pašalina ūminio ir lėtinio hepatito perėjimą. Tokie pacientai nekelia pavojaus kitiems. Didelė virusinė apkrova prisideda prie patologinio proceso chronizacijos ir hepatito infekcijos galimybės žmonėms, kurie liečiasi su pacientu.

    Taip pat yra ryšys tarp virusinių genų koncentracijos kraujyje ir kepenų cirozinės degeneracijos bei jo parenchimos vėžio atsiradimo.

    PCR testai padeda gydytojui aptikti virusų nešiklius.

    Antivirusinio gydymo veiksmingumas priklauso nuo hepatito B DNR koncentracijos sumažėjimo kepenų kraujyje laipsnio. Pakankamas rezultatas - viruso apkrovos sumažinimas 1-2 kartus, intensyvus gydymas nuo trijų mėnesių iki šešių mėnesių. Mažesni tarifai reikalauja pakeisti gydymą.

    Patologijos raidos prognozė ir tinkamo gydymo paskyrimas yra:

    • kiekybinis kepenų viruso DNR kiekis kraujo serume;
    • susiję biocheminiai parametrai (pvz., leukocitų kiekis kraujyje ir bilirubino kiekis);
    • virusinės infekcijos žymenys;
    • kepenų biopsijos rezultatai.

    Bendrosios paskirties PGR

    Analizės naudojant polimerazės grandinės reakciją padeda gydytojui:

    • aptikti viruso nešiklius;
    • numatyti hepatito B tipo vystymąsi;
    • įsitikinkite, kad liga tampa lėtine;
    • stebėti viruso aktyvumą visuose vystymosi etapuose;
    • nustatyti mutantinius ir paslėptus hepatito B padermes;
    • vertinti viruso gydymo efektyvumą pasirenkant tam tikrą taktiką ir pakeitus ją nepakankamos sėkmės atveju.

    Metodo pranašumai

    Skirtingai nuo kitų B hepatito diagnozei naudojamų tyrimų, PCR turi:

    PCR analizė yra labai jautri.

    1. Išskirtinis jautrumas. Ši technika leidžia tyrėjui nustatyti ligos sukėlėją, net jei jo DNR molekulių koncentracija kraujyje yra minimali. Tai leidžia jums imtis prevencinių ir gydomųjų priemonių ankstyvoje ligos stadijoje, kai, matyt, tai dar nėra išreikšta jokių simptomų.
    2. Platus galimybių aprėptis. PCR gali aptikti ne tik virusinio hepatito B sukėlėjus, bet ir daug kitų patologijų.
    3. Visuotinis požiūris. Moksliniai tyrimai gali būti kraujas, seilės, gleivinės ląstelės ir oda.
    4. Efektyvumas. Išvada bus paruošta tiksliai vieną dieną po kraujo mėginių paėmimo (pačios analizės rezultatas gaunamas ne vėliau kaip per 7 valandas).
    5. Patikimumas. Visomis PCR metodo sąlygomis niekada nerodomi klaidingi duomenys.
    6. Kainos prieinamumo tyrimas. Kaina, PCR, yra tik šiek tiek didesnė nei įprastiniai testai, kurie naudoja kraują kaip biomateriją.

    Vienintelė tyrimų kaina yra jos technologinis sudėtingumas. Siekiant aukštos kokybės PCR, reikia itin švarios biomedžiagos, modernios įrangos ir gerai apmokyto personalo. Pageidautina, kad diagnostikos metodai būtų taikomi taikant šį metodą specializuotoms laboratorijoms.

    Virusinis hepatitas B reiškia ligas, kurių visiškai išgydyti galima tik anksčiausiai vystymosi stadijose. Nustatykite ligą šioje fazėje, padedančią nustatyti padidėjusio jautrumo diagnozę pagal PGR. Pirmieji simptomai, kurie sukelia įtarimą dėl viruso kepenų pažeidimo, turėtų būti priežastis pasikonsultuoti su specialistu. Jei diagnozė patvirtinama, gydymas turi prasidėti nedelsiant. Tai pagerins prognozę ir padidins tikimybę, kad daugelį metų kepenys bus palaikomos sveikoje būsenoje.