Įvedus šiuolaikines medicinos technologijas, didėja imunocheminių diagnostikos metodų galimybės, galinčios greitai ir tiksliai atpažinti ligą, kai kiti metodai yra bejėgiai. Suprasdami, kad hepatito B virusas gali būti organizme labai mažoje koncentracijoje, kur jis negali būti aptiktas net tokiu patikimu metodu kaip PCR, būtina iš naujo išnagrinėti šios ligos diagnozavimo problemą ir įvertinti imuninės analizės galimybes.
Šioje medžiagoje mes išsamiai analizuosime visus, susijusius su šio tipo laboratoriniais tyrimais. Jūs sužinosite, kas yra fermento imunologinė analizė ir kaip ji atliekama, koks yra Australijos antigenas ir kaip tai nustatoma, ką nesuprantamos santrumpos Hbs ag, Hbcor, vidutiniškai ir jų vaidmuo analizuojant analizę, taip pat gausite daug naudingos ir įdomios informacijos.
Straipsnio turinys:
Bendra informacija apie ELISA
ELISA (sutrumpintas ELISA) yra laboratorinis diagnostikos metodas, kuris gali aptikti tiek antigenus, tiek antikūnus iš įvairių infekcijų, įskaitant hepatitą B. Dabartinės žinios apie viruso savybes ir organizmo imuninio atsako savybes leidžia ne tik aptikti infekciją, bet ir ją identifikuoti. vakcinacijos veiksmingumas ir gydymo veiksmingumas.
Fermento imunologinės analizės esmė
ELISA yra pagrįsta „antigenų-antikūnų“ reakcija arba greičiau jo savybėmis.
Reaguodamas į svetimos medžiagos (antigeno), kuris visų pirma yra viruso baltymai, invaziją organizmas gamina apsauginius baltymus - antikūnus. Antikūnai susiduria su sudėtinga reakcija su antigenu, blokuodami jo aktyvumą.
Daugiau kalbėsime apie žemiau esančius antigenus ir antikūnus, bet dabar pastebėsime, kad kiekvienam antigenui yra griežtai individualūs arba kaip gydytojai sako, homologiniai antikūnai. Taigi, jei norime nustatyti konkretų antigeną kraujyje, mes naudosime diagnostinę tabletę su antikūnais. Jei yra kraujo antigenas, jis reaguoja su antikūnais, kuriuos galima aptikti įvairiais būdais. Ir atvirkščiai. Jei norime rasti antikūnų, mums reikia tabletės su atitinkamu antigenu.
Dažniausiai krūtinės diagnostinė vertė yra tik tie antikūnai, su kuriais galite diagnozuoti beveik bet kokią infekciją. Tačiau hepatito B viruso ypatumas yra tas, kad pagrindinį vaidmenį diagnozėje atlieka vienas iš antigenų - Australijos antigenas.
Kaip yra IFA
Apsvarstykite tipinį ELISA metodą konkrečiam pavyzdžiui, kai norite nustatyti antikūnus prieš patogeną.
Diagnostikai naudojama tabletė su 96 šulinėlių, kurie yra prisotinti atitinkamu antigenu. Be to, procedūra yra tokia:
serumas taikomas visoms ląstelėms;
homologiniai antikūnai reaguoja su antigenu ir prijungiami prie plokštelės;
išplaunama tabletė, pašalinant nesusijusius antikūnus;
tada į ląsteles patenka fermentinė etiketė - medžiaga, kuri reaguoja su antikūnais ir sukelia ląstelės turinio dažymą.
Tai yra standartinė ELISA procedūra su dažymu, kuri naudojama, pavyzdžiui, imunochromatografinėse bandymo juostose.
ELISA neapsiriboja kokybiniu antikūnų arba patogeno antigenų nustatymu. Kuo daugiau antikūnų yra tabletės ląstelėse, tuo intensyvesnis dažų tirpalas. Lyginant jos optinį tankį su valdymu, šiuolaikinė įranga gali gana tiksliai apskaičiuoti antikūnų koncentraciją vieneto tūriui. Taigi atliekama kiekybinė ELISA, matavimo matas, kuriuo dažniausiai yra optinio tankio vienetai (EOP).
Imunochemiluminescencinė analizė
Šiandien yra keletas dešimčių ELISA tipų, kurių kiekviena turi pirmenybę. Populiariausia hepatito B diagnozė yra imunochemiluminescencinė analizė.
Šios analizės fermentinė etiketė nėra chromatinai, kaip ir standartinėje ELISA, bet specialios medžiagos - fosforai, dėl kurių kompleksas šviečia ultravioletinėje šviesoje.
Naudojant specialų prietaisą - luminometrą, galite tiksliai nustatyti emisijos lygį ir, atitinkamai, norimos medžiagos koncentraciją.
Naudojant ELISA metodus, nustatomi beveik visi esami hepatito B viruso antigenai ir jų antikūnai.
Hepatito B viruso antigenai: Hbs, Hbe ir Hbc
Terminas antigenas (antigenas) yra kilęs iš dviejų angliškų žodžių: antikūno - antikūno ir generatoriaus gamintojo. Taigi, pagal antigeną suprasti bet kokią medžiagą, kuri sukelia antikūnų susidarymą organizme. Dažniausi antigenai yra baltymų junginiai.
Šiandien yra žinomi trys hepatito B viruso antigenai: hbsag, hbc ir hbe.
Australijos antigenas
Baltymų, kurie yra patogeno hepatito B išorinio apvalkalo dalis, buvo aptikta jau seniai prieš pat viruso atradimą. Šis antigenas gavo savo pavadinimą, nes jis pirmą kartą buvo identifikuotas iš vietinių Australijos gyventojų. Tačiau, iš pradžių, baltymas buvo laikomas ne antigenu, bet visiškai paplitęs vietinių gyventojų kraujo elementas, o jo sąsajos su kepenų ligomis sąmoningumas šiek tiek vėliau.
Ilgalaikis antigeno išsaugojimas kraujyje ir antikūnų nebuvimas rodo HBeAg teigiamo lėtinio hepatito B susidarymo galimybę.
Šiandien profesinėje literatūroje praktiškai nerandamas pavadinimas „Australijos antigenas“ ir jį pakeitė tarptautinė santrumpa „HbsAg“ (hepatito b paviršiaus antigenas - hepatito B paviršiaus antigenas). Be to, galite rasti santrumpų hbs antigenas arba tiesiog hbs. Bet kuri iš šių santrumpų yra priimtina ir gali būti papildyta įrašant HBV arba HBV - hepatito B virusą (hepatito b virusą).
B hepatito viruso paviršiaus antigenas turi vieną puikų bruožą, dėl kurio jis yra nepakeičiamas diagnostinis žymuo - jo koncentracija kraujyje gali pasiekti labai aukštą kiekį, iki pusės miligramo kraujo mililitre. Taip yra todėl, kad tik nedidelė dalis naujų HBsAg, susidariusių reprodukuojant hepatito B virusą, vyksta į naujų virusinių dalelių membranų statybą, o likusi dalis laisvai cirkuliuoja kraujyje. Kaip rezultatas, hbs dalelių kiekis kraujyje gali viršyti šimtų tūkstančių kartų virionų skaičių.
Ši savybė daro Australijos antigeną pagrindiniu hepatito B atrankos diagnozės ženklu, kuris kraujyje aptinkamas jau 4-6 savaites po infekcijos. Kaip antikūnai, paviršiaus antigenas juos palaipsniui pakeičia. Jei po 6 mėnesių HBsAg išlieka, tai rodo infekcijos perėjimą prie lėtinės formos.
Pastaruoju metu, kai tapo įmanoma nustatyti hbs hbv koncentraciją, jos vaidmuo diagnozėje išaugo dar labiau, nes, remdamasis antigeno lygiu, gali išskirti lėtinį hepatitą B (HBV) nuo sveikos nešiklio būklės bei stebėti gydymo veiksmingumą.
Pagrindiniai antigenai
Viruso branduolyje - nukleokapsidas - yra baltymai, kurie kontroliuoja HBcoreAg ir HBeAg viruso dauginimąsi.
HBcoreAg, kuris taip pat gali būti vadinamas HBCore antigenu, hbc arba branduolio antigenu, gali būti randamas tik kepenų audiniuose, tiesiogiai hepatocitų branduoliuose. Šis antigenas nėra aptinkamas kraujyje ir neturi diagnostinės vertės.
Hepatito viruso struktūra
HBeAg (HBe, HBprecoreAg) - priešingai, atlieka svarbų vaidmenį diagnozuojant. HBeAg ir HBcoreAg yra artimi giminaičiai. Jie yra labai panašūs į struktūrą ir daugiausia skiriasi molekulių erdvinėje padėtyje. Kitaip nei HBcore, HBe nėra nukleokapsido sienos dalis ir laisvai cirkuliuoja kraujyje.
HBe vaidmuo infekciniame procese nėra pakankamai aiškus, tačiau jo elgesio ypatumai ir jų ryšys su infekcinio proceso eiga jau buvo pakankamai ištirti. HBeAg rodo aktyvų viruso reprodukciją ir leidžia patikimai nustatyti lėtinės CHB - HBeAg-teigiamos arba HBeAg-neigiamos fazės fazę.
HBe gali būti aptinkamas kraujyje jau ūminio hepatito B viruso (HBV) inkubacijos laikotarpiu, o didelė HBeAg koncentracija 3 savaites greičiausiai rodo lėtinio proceso grėsmę. HBe koncentracija yra tiesiogiai susijusi su Dane dalelių (vadinamųjų hepatito B viruso dalelių) kiekiu - kuo didesnis HBe kiekis, tuo didesnė HBV DNR koncentracija kraujyje.
HBeAg yra pagrindinis infekcinio ligos žymuo. HBeAg teigiamų pacientų kraujas yra daug užkrečiamas nei HBeAg-neigiamas. Pavyzdžiui, nėščioms moterims, turinčioms teigiamą poveikį HBe ir Hbs, infekcijos perdavimo vaikui tikimybė pasiekia 50%, o tokio įvykio tikimybė HBe-neigiama, bet teigiamų motinų Hbs - 10-30%.
Hbe lemia lėtinio hepatito eigą. HBeAg teigiamas lėtinis hepatitas B turi daug nepalankesnę prognozę dėl cirozės išsivystymo.
Tai turbūt viskas, ką reikia žinoti apie HBV antigenus, ir mes pereiname prie antrosios hepatito B žymenų grupės - antikūnų.
B hepatito esmė ir diagnozė
Kai tik etapas virsta gelta, pradžios ir gleivinės pradeda tapti geltonos, sveikatos būklė smarkiai pablogėja. Svarbu pabrėžti, kad kepenys auga ir išsikiša nuo pakrančių arkos. Odos dažymas geltonos spalvos atspalvyje vyksta palaipsniui. Kepenų fermentų kiekis kraujyje auga, o timolio mėginys nesikeičia.
Ligos diagnostika: pagrindiniai metodai ir sąvokos
B hepatito diagnostika atliekama keliais būdais:
1. Pirmiausia gydytojas turi imtis anamnezės ir atlikti išsamų asmens tyrimą. Tyrimo metu didelis dėmesys skiriamas tokioms akimirkoms kaip:
- ar narkotikų ar kitų į veną įvedamų priemonių įvedimas;
- ar buvo kraujo perpylimų;
- ar buvo atliktos chirurginės intervencijos;
- ar buvo pakenkta odos vientisumui;
- kas yra seksualiniai santykiai;
- ar pacientas kontaktuoja su hepatitu B ar jo nešikliu.
Jei įvyko kuris nors iš šių elementų, nurodoma, kiek laiko. Paprastai infekcija atsiranda kontaktuojant nuo 6 savaičių iki šešių mėnesių iki pirmųjų hepatito simptomų atsiradimo.
2. B hepatito laboratorinė diagnostika, antigenų ELISA analizė ir B hepatito antikūnai. Šio tipo tyrimas skirtas nustatyti 3 antigenus:
- HBsAg (antigenas, esantis paviršutiniškai), t
- HBcAg (esantis viduje)
- HBeAg (sujungtas su ankstesniu antigenu). Liga pasižymi ankstyvu šių antigenų nustatymu kraujyje.
Žmonės, kenčiantys nuo hepatito B ir kuriuose yra šių antigenų kraujyje, yra labai užkrečiami. Jie gali užkrėsti kitus žmones. Jei HBsAg nėra žmogaus kraujo, tai rodo, kad jis yra sveikas. Jei asmuo serga, tada organizmas pradeda išskirti antikūnus prieš esamus antigenus.
3. B hepatito diagnostika naudojant PCR metodą, skirtą nustatyti HBV DNR kraujotakos sistemoje. Jei rezultatas yra teigiamas, asmuo turi hepatitą. HBV DNR analizė vadinama kokybine. Taip pat yra kiekybinė PGR. Kiekybinis PCR suteikia galimybę nustatyti apkrovą su hepatito viruso buvimu. Kas yra virusų apkrova? Tai yra HBV DNR kopijų skaičius 1 ml kraujo. Kiekybinė hepatito analizė rodo viruso aktyvumą.
4. Biochemijos kraujo tyrimas. Ši analizė apima kepenyse gaminamų fermentų skaičiaus nustatymą. Tokie fermentai yra ALT, AST. Jie yra kepenų ląstelių viduje - hepatocitai. Jei kepenų ląstelės yra pažeistos, fermentai išsiskiria ir patenka į kraują. Teigiama analizė svarstoma tik tada, kai kepenų fermentų kiekis viršija normą. Tyrimas rodo, ar kepenyse ir jų veikloje yra uždegiminių procesų.
5. Ultragarsinis tyrimas, elastometrija ir kt. Galima atlikti hepatito diagnozę ir ne laboratorinius metodus. Naudojant ultragarsą tiriami pilvo organai. Ultragarsas suteikia aiškų vaizdą apie bet kokį kepenų ir jo kraujagyslių uždegiminį procesą. Efektyviai atlikti kepenų elastometriją. Elastometrinis metodas leidžia suprasti fibrozės laipsnį kepenų audinyje.
6. Svarbiausia analizė yra hepatito B antigenų buvimas raudonųjų kraujo kūnelių masėje, jei jie egzistuoja, tai rodo infekcijos buvimą žmogaus organizme.
7. Laboratorinio tipo hepatito diagnozė apima antigenų ir antikūnų nustatymą eritrocitų masėje. Dažniausiai HBsAg pasireiškia kraujotakos sistemoje net hepatito inkubacijos laikotarpiu. Asmuo nežino apie savo ligos vystymąsi, o kraujo pokyčiai jau vyksta. Ūmus hepatitas, HBsAg išnyksta iš kraujo. Paprastai HBsAg nėra per pirmąjį icterinio laikotarpio mėnesį, o antikūnai prieš šį antigeną pradeda skaičiuoti kraujotakos sistemoje praėjus 90 dienų po infekcijos.
Teigiamas antikūnų tyrimas nereiškia, kad asmuo turi hepatitą. Gali būti, kad jis anksčiau patyrė hepatitą be D-agento. Jei po gydymo paciento kraujyje nėra HBsAg, tačiau yra antikūnų, tai rodo gerą prognozę, rodančią, kad pacientas atsigauna. Jei pacientas turi lėtinį ar sunkų hepatitą, antikūnai gali atsirasti jau nuo pirmųjų ledinio laikotarpio dienų.
Patikimas ekvivalentas yra anti-HBc IgM kraujyje. Jie atskleidžiami ikimokyklinio laikotarpio pabaigoje. Jie yra per visą akivaizdžių apraiškų laikotarpį. Jei analizėje yra anti-HBc IgM, tai reiškia, kad virusas daugėja. Pradėjus regeneraciją, anti-HBc IgM išnyksta. Ūminė ligos fazė gali sukelti anti-HBc IgG tyrimą. Jie bus aptikti per visą žmogaus gyvenimą.
Kai baigiamas hepatito (ypač autoimuninės) inkubacijos laikotarpis, HBeAg pradeda atsirasti kraujyje. Jie informuoja apie aktyvų dalijimąsi ir infekcinių dalelių padidėjimą. Kai tik prasideda ledinis laikotarpis, NVAAg dingsta. Jis pakeičiamas anti-HBe. Anti-HBe rodo, kad infekcijos aktyvumas yra mažesnis ir netrukus atsigaus. Tačiau viruso dauginimasis nesibaigia!
Ūmus hepatitas gali virsti lėtiniu. Apie tai kalbės identifikuoti kraujyje. Jei tai yra, tai reiškia, kad tikimybė transformuoti procesą į lėtinę formą yra didelė. HeVag buvimas rodo, kad pacientas yra labai užkrečiamas.
Reikia nepamiršti, kad hepatito B laboratorinė diagnozė, kuri duoda neigiamą rezultatą HBsAg, neatmeta pačios diagnozės. Svarbus elementas yra anti-HBc IgM buvimas kraujyje. Šie antikūnai tiksliai patvirtins ligą. Jei kraujo tyrime nėra anti-HBc IgM, tai gali rodyti HBV buvimą, o šių antikūnų buvimas rodo infekcijos intensyvėjimą.
B hepatito DNR aptikimas
Svarbiausias tyrimas viruso DNR buvimui nustatyti yra PCR. Analizė rodo infekcinio proceso veiklą. Šiuo metodu galite sužinoti apie ligos prognozę.
Jei hepatitas yra palankesnis, HBV DNR išnyksta iš kraujo pradinio infekcijos proceso laikotarpiu. Laboratorinė diagnostika PCR forma pateikia duomenis apie gydymo kokybę (ar tam tikro vaisto poveikis).
Norint suprasti, kokią taktiką reikia skirti skiriant terapines priemones, būtina atlikti kiekybinį PGR metodą. Kiekybinis PCR rodo teigiamą gydymo reakciją.
Diagnostikos pagrindas
Jei norite atlikti tinkamą diagnozę, reikės atlikti šiuos tyrimus:
- Kasdienis patikrinimas, palpacija.
- Kepenų ultragarsas.
- Biocheminė kraujo analizė (atliekama pakartotinai).
- HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc IgM, anti-HBc, HBV DNR tyrimas.
- HBV ir HCV žymenys (virusinis hepatitas neįtrauktas).
- Kepenų punkcija.
- Kepenų biopsija. Naudojant specialią adatą, pilvo sienelė praduriama ir mažas kepenų gabalas pašalinamas histologiniam tyrimui (gabalas yra ne didesnis kaip pusė gramo). Biopsija yra naujausias hepatito tyrimo metodas. Jos dėka galite tiksliausiai kalbėti apie infekcinio proceso, kepenų fibrozės aktyvumo laipsnį. Biopsija yra chirurginė procedūra. Tai gali sukelti komplikacijų, todėl ji dažnai nenaudojama diagnozei.
- Fibroelastografija. Jis gali būti naudojamas kepenų audinio tankiui įvertinti. Technika yra panaši į ultragarso. Tyrime naudojamas specialus jutiklis, sumontuotas ant odos kepenų projekcijos vietoje.
- Fibrotest. Jis pagrįstas tam tikro kraujo kiekio skaičiavimu.
Lėtinis hepatitas B
Lėtinis B hepatito atvejis:
1 etapas - viruso replikacija. Virusas padaugėja iš padidėjusio aktyvumo.
2 etapas - integracija. Virusas nustoja daugintis. Viruso genomas pradeda integruotis į normalių kepenų ląstelių, hepatocitų, DNR.
Siekiant nustatyti viruso progresavimo greitį, svarbu suprasti proceso sunkumą, rezultatus, kepenų ląstelių sutrikimo laipsnį. Lėtinio hepatito laboratorinė diagnostika grindžiama:
Jei hepatitas HBeAg-teigiamas (teigiama analizė), tada eritrocitų masė bus:
- veisimo etape - HBsAg, HBeAg, anti-HBc IgM, anti-HBc (bendras), HBV DNR;
- hepatocitų įterpimo į DNR stadijoje - HBsAg, anti-HBe, anti-HBc (iš viso), HBV DNR.
Jei hepatitas yra seronegatyvus, tada kraujo masėje bus HBsAg, anti-HBe, anti-HBc IgM, anti-HBc, HBV DNR. Be to, jų buvimas jokiu būdu nepriklauso nuo infekcinio proceso etapo.
Diferencinė diagnostika
Diagnozuodamas gydytojas privalo diferencijuoti B hepatitą su kitomis ligomis - hepatitu A, C, E, D. Galutinė diagnozė gali būti atlikta tik po to, kai kraujo masėje buvo nustatyti tam tikri kiekvienam hepatito ląstelėms būdingi žymekliai.
Hepatitas turėtų būti diferencijuojamas su kitomis svarbiomis ligomis: ūminėmis kvėpavimo takų virusinėmis infekcijomis, tulžies akmenimis, apsinuodijimu maistu, žarnyno infekcija, chirurgine pilvo organų patologija ir daugeliu kitų ligų.
Autoimuninis hepatitas
Autoimuniniam hepatitui diagnozė apima šiuos svarbiausius tyrimus:
- Raudonųjų kraujo kūnelių masės (OAK) analizė. Paaiškinimas: autoimuniniam hepatitui, sumažėjusiam leukocitų kiekiui, trombocitams ir padidėjusioms ROE yra pastebėta anemija (normocitinė) kraujyje. Tačiau galima tikėtis didesnio anemijos laipsnio.
- Šlapimas. Šlapimo analizės iššifravimas: yra baltymų, raudonųjų kraujo kūnelių, bilirubino.
- Biochemijos kraujo tyrimas. Labai svarbi analizė. Aiškinimas: padidėjęs bilirubino kiekis, padidėjusi arginazė, sumažėjęs albuminas, padidėjęs γ-globulinų kiekis ir timolio testas. Sumažintas bandymas. Kai kurie rodikliai gali būti padidinti 2 ar daugiau kartų. Tai yra teigiamas testas autoimuniniam hepatitui.
- Imunologinė analizė. Dekodavimas: sumažėja T-limfocitų slopintojų, raudonųjų lupų ląstelės atsiranda eritrocitų masėje, didėja imunoglobulinų skaičius, antikūnai prieš eritrocitus.
Teigiamas hepatito tyrimas gali būti nustatytas taikant serologinį tyrimo metodą. Autoimuninis hepatitas yra heterogeninė liga.
ELISA viruso hepatito atveju
2017 m. Kovo 9 d., 16:25 Ekspertų straipsniai: Nova Vladislavovna Izvochkova 0 3,608
Siekiant aptikti virusinį hepatitą organizme, medicina plačiai naudoja fermento imunologinį tyrimą, pagrįstą antigenų koncentracijos ir tipo nustatymu, naudojant antikūnus ir fermentus. Jis atliekamas etapais, atliekant laboratorinius tyrimus, labai tiksliai nurodant indikacijas. Priklausomai nuo antikūnų kiekio ir klasės, fermento, naudojančio ELISA, spalva ir koncentracija, todėl gydytojas diagnozuoja ligą, keičiasi.
Kas yra ELISA?
Virusinio hepatito buvimas paciento organizme nustatomas naudojant serologinį kraujo analizės metodą HCV virusui ir žymenims (kūnams ir antikūnams), nurodant jį. Su fermentu susijęs imunosorbento tyrimas (ELISA) tiria įvairius virusus, mažos molekulinės masės junginius, makromolekules, jų kokybinius ir kiekybinius rodiklius, naudojant reakcijos į jų antigenus apraiškas. Norėdami tai padaryti, naudokite fermentą kaip ženklo registravimo ženklą. Jis vis dažniau vartojamas medicinoje, nes ELISA aiškiai nustato gerai apibrėžtus antigenus, neklaidindama juos su kitais, turi didelį jautrumą invazijos į virusinį hepatitą buvimui.
Tokios diagnozės trūkumas yra nesugebėjimas nustatyti ligos priežasties, nes šis metodas rodo tik organizmo imuninės sistemos reakciją. Analizės rezultatus veikia anksčiau atlikta vakcinacija. Prieš 8 valandas prieš analizę rekomenduojama susilaikyti nuo valgymo, nikotino, alkoholio. ELISA tyrimo pagrindas yra organizmo fermentinis ir imuninis atsakas į virusą. Biologinės molekulės jungiasi prie ląstelės ir jos elementų, mikroorganizmų, aptinka virusą, tada veikia fermentai, kurie leidžia išreikšti imuninį atsaką matomame ir išmatuojamame parametre.
Indikacijos analizei
Virusinis hepatitas organizme gali sukelti vėžį ir kepenų cirozę. Laiko diagnozavimo svarba yra neginčijama. Pagrindinis diagnozės metodas yra ELISA testas, kuris labai tiksliai nustato HCV viruso (IgM ir IgG) buvimą ir jo mikroelementų aktyvumą. Privalomi virusinio hepatito praėjimo testai:
- Žmonės su rizikos grupėmis (narkomanai, AIDS sergantieji, medicinos ir teisėsaugos institucijų darbuotojai).
- Žmonės su ūminiu ar lėtiniu hepatitu.
- Nėščios ir planuojančios nėštumo moterys.
ELISA pripažįsta ligą bet kuriame etape. Analizės rezultatai vidutiniškai yra paruošti per 2 dienas.
Kriterijai, lemiantys analizės svarbą
ELISA testas lemia IgG, IgM, IgA klasės antikūnų buvimą. Diagnozuodamas virusinį hepatitą, gydytojas neatsižvelgia į jų tipą, nes bet koks toks HCV viruso pasireiškimas jau rodo ūmią arba lėtinę ligos stadiją. Ankstyvosiose ligos stadijose IgM lygis pakyla (5 dienos po infekcijos); 15 - 20 dieną IgG antikūnai atsiranda ir gali išlikti žmogaus kraujyje ilgą laiką net po išgydymo; IgA - pasireiškia po 10-14 dienų, po gydymo sumažėja.
Jei po narkotikų vartojimo aptinkama IgG ir IgA, o jų lygis išlieka toks pats - nešiklis turi lėtinę hepatito formą. Svarbus bandymo kriterijus bus aiškus turimų antikūnų klasės ir jų kiekio apibrėžimas. Remdamiesi tuo, galite sužinoti ne tik apie ligos buvimą, bet ir apie jo vystymosi etapą. Tokių elementų aptikimas paciento kraujyje leidžia nustatyti tinkamą ir savalaikį gydymą, kad būtų išvengta rimtesnių pasekmių.
Kaip tai daroma?
Paskirti tiesioginį, o ne tiesioginį ELISA testą. Tiesioginiai etapai:
- Biologinės medžiagos rinkimas ir įdėjimas į specialias skyles.
- Per 15-30 minučių antigenai yra pritvirtinti prie šulinių paviršiaus.
- Antikūnų pridėjimas prie rastų antigenų. Visi liko 1-5 val.
- Pašalinti neprijungtus antigenus (pilant šulinių turinį).
- Išplaukite šulinius specialiu tirpalu.
- Į šulinėlius įpilkite fermento tirpalo. Palikite 30 minučių - 1 val.
- Kolorimetrijos naudojimas (spalvos nustatymas ir šulinio turinio spalvos koncentracija, palyginimas su rodikliais, kurie yra tiesiogiai proporcingi viruso koncentracijai).
Netiesioginis ELISA metodas vyksta, naudojant aptiktus antigenus nenurodytus antikūnus ir paskui juos žymint. Pirma, kraujas paimamas iš paciento ir per 15-30 minučių plinta per šulinius. (antikūnai yra pritvirtinti angomis). Tada 1–5 valandos į juos dedami nepažymėti antikūnai (susidaro antikūnų su antigenais jungtis - imuninis kompleksas). Toliau nepritvirtinti mikroelementai pilami iš šulinių ir plaunami specialiu tirpalu. Kitame etape 15-30 minučių laboratorijos technikas į šulinius prideda pažymėtus mikroelementus. (tai susieja nepažymėtą etiketę su komplekso "antikūno-antikūno-antigeno" formavimu. Ekstra (laisvi) vėl nuvalomi drenuojant ir plaunant tirpalu. Kitas yra fermentas, kuris keičia spalvą 5-30 minučių. lieka skylių ir spalvų duomenys lyginami su lentelės rodiklių duomenimis. Netiesioginė ELISA yra tikslesnė.
Ką rodo ELISA viruso hepatitas?
Imunologinis tyrimas leidžia nustatyti infekcijos buvimą (visų rūšių hepatito virusai, ŽIV, herpes, sifilis, citomegalovirusas, tymai, raudonukė, kiaulytės virusas, Epstein-Barr virusas) - autoimuninių ligų, vėžio ląstelių žymuo. Nurodo reprodukcinių funkcijų pažeidimus (testosterono, prolaktino, estradiolio ir progesterono pokyčius), skydliaukės sutrikimą, helminto užkrėtimą, chlamidijas. Efektyvus nustatant ureaplazmosą, garų kosulį, Dange virusą, Vakarų Nilo virusą, Borrelia. Apibrėžimų sąrašas yra didelis, apima daugelį elementų.
Rezultatų patvirtinimas
HCV viruso antigeno nustatymas ELISA metodu suteikia 98% tikslumo. Jis taip pat naudojamas pakartotiniam biologinės medžiagos pakartotiniam ankstesnių rodiklių tyrimui. IgM antigenų buvimas nėra ūminio hepatito rodiklis ir reikalauja papildomų tyrimų. Pakartojant ELISA testą, rezultatai sutampa su 90–100%. Minimalaus neatitikimo atvejais vidutinė vertė laikoma rodikliu. Dėl maksimalaus tikslumo gydytojams patartina atlikti biocheminį kraujo tyrimą. Norėdami išbandyti rezultatus po fermento imunologinio tyrimo, galite naudoti kitus diagnostikos metodus.
B hepatito viruso tyrimai (ELISA ir PCR) t
Hepatito B viruso antigenas (HBsAg)
Hepatito B paviršiaus antigenas serume paprastai nėra.
B hepatito paviršiaus antigeno (HBsAg) nustatymas serume patvirtina ūminę arba lėtinę hepatito B viruso infekciją.
Ūminės ligos metu HBsAg nustatomas serume per paskutines 1-2 inkubacijos laikotarpio savaites ir pirmąsias 2-3 klinikinio laikotarpio savaites. HBsAg cirkuliacija kraujyje gali būti apribota iki kelių dienų, todėl turėtumėte stengtis anksti ištirti pacientus. ELISA metodas leidžia aptikti HBsAg daugiau nei 90% pacientų. Beveik 5% pacientų, jautriausi tyrimo metodai HBsAg neaptinka, tokiais atvejais viruso hepatito B etiologiją patvirtina anti-HBcAg JgM arba PCR.
HBsAg koncentracija serume visose hepatito B sunkumo formose ligos aukštyje turi didelį svyravimų diapazoną, tačiau yra tam tikras modelis: ūminiu laikotarpiu tarp HBsAg koncentracijos serume ir ligos sunkumo yra atvirkštinis ryšys.
Aukštos HBsAg koncentracijos dažniau būna lengvos ir vidutinio sunkumo ligos formos. Sunkių ir piktybinių formų atveju HBsAg koncentracija kraujyje dažnai yra maža, o 20% pacientų, sergančių sunkia forma, o 30% - piktybinių antigenų kiekis kraujyje, gali būti visai nenustatytas. Pacientų, sergančių antikūnais prieš HBsAg, atsiradimas šiame fone laikomas nepalankiu diagnostiniu ženklu; jis nustatomas piktybinėmis hepatito B formomis.
Ūminio hepatito B metu HBsAg koncentracija kraujyje palaipsniui mažėja iki visiško šio antigeno išnykimo. Daugeliui pacientų HBsAg išnyksta per 3 mėnesius nuo ūminės infekcijos pradžios.
HBsAg koncentracijos sumažėjimas daugiau nei 50% iki ūminio periodo trečiojo savaitės pabaigos, kaip taisyklė, rodo, kad infekcijos procesas yra baigtas. Paprastai pacientams, kurių ligos aukštyje yra didelė HBsAg koncentracija, ji nustatoma kelis mėnesius.
Pacientams, kurių HBsAg koncentracija yra nedidelė, ji išnyksta daug anksčiau (kartais praėjus kelioms dienoms nuo ligos pradžios). Apskritai HBsAg aptikimo laikas svyruoja nuo kelių dienų iki 4-5 mėnesių. Didžiausias HBsAg nustatymo laikotarpis su sklandaus ūminio hepatito B eiga neviršija 6 mėnesių nuo ligos pradžios.
HBsAg galima rasti sveikų žmonių, paprastai, profilaktikos ar atsitiktinių tyrimų metu. Tokiais atvejais tiriami kiti virusinio hepatito B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg žymenys ir tiriama kepenų funkcija.
Neigiamų rezultatų atveju būtina atlikti pakartotinius HBsAg tyrimus.
Jei pakartotiniai kraujo tyrimai ilgiau nei 3 mėnesius atskleidžia HBsAg, šis pacientas klasifikuojamas kaip lėtinis pacientas, sergantis virusiniu hepatitu B.
HBsAg yra gana dažnas. Pasaulyje yra daugiau nei 300 mln. Vežėjų, o mūsų šalyje yra apie 10 mln.
HBsAg cirkuliacijos nutraukimas ir vėlesnė serokonversija (anti-HBs susidarymas) visada rodo, kad organizmas atsinaujina.
Kraujo tyrimas dėl HBsAg buvimo yra naudojamas šiems tikslams:
- inkubacijos laikotarpis;
- ūminė liga;
- ankstyvas atkūrimas;
- nuolatinis lėtinis hepatitas;
- kepenų cirozė;
rizikos grupių pacientams tikrinti ir nustatyti:
Tyrimo rezultatų vertinimas
Tyrimo rezultatai išreiškiami kokybiškai - teigiami arba neigiami. Neigiamas rezultatas rodo HBsAg serumo nebuvimą. Teigiamas rezultatas - HBsAg identifikavimas rodo ūminio virusinio hepatito B inkubaciją arba ūminį periodą, taip pat lėtinį virusinį hepatitą B.
Antikūnai prieš hepatito B viruso JgG branduolinį antigeną (anti-HBcAg JgG)
Paprastai serumo anti-HBcAg serume nėra.
Pacientams, sergantiems anti-HBcAg JgG, pasireiškia ūminiu virusinio hepatito B laikotarpiu ir išlieka visą gyvenimą. Anti-HBcAg JgG yra pirmaujantis perduoto HBV žymuo.
Diagnozuoti naudojami anti-HBcAg JgG kraujo tyrimai:
Tyrimo rezultatų vertinimas
Tyrimo rezultatas išreiškiamas kokybiškai - teigiamas arba neigiamas. Neigiamas rezultatas rodo, kad nėra anti-HBcAg JgG serumo. Teigiamas rezultatas - anti-HBcAg JgG nustatymas rodo ūminę infekciją, sveikimą arba anksčiau perduotą virusinį hepatitą B.
Hepatito B viruso "e" antigenas (HBeAg)
Paprastai HBeAg serume nėra.
HBeAg galima rasti daugumos pacientų, sergančių ūminiu virusiniu hepatitu B, serume. Jis paprastai išnyksta kraujyje prieš HBs antigeną. Didelis HBeAg kiekis per pirmąsias ligos savaites arba jo aptikimas ilgiau nei 8 savaites suteikia pagrindo įtarti lėtinę infekciją.
Šis antigenas dažnai aptinkamas lėtiniu virusiniu etiologijos hepatitu. Ypač domina HBeAg apibrėžimas yra tai, kad jo aptikimas apibūdina aktyvią replikacinę infekcijos proceso fazę. Nustatyta, kad didelės HBeAg koncentracijos atitinka aukštą DNR polimerazės aktyvumą ir apibūdina aktyvią viruso replikaciją.
HBeAg buvimas kraujyje rodo, kad jis yra didelis infekciškumas, t.y. aktyvaus hepatito B infekcijos buvimas tiriamame organizme ir aptinkamas tik esant HBs antigenui kraujyje. Pacientams, sergantiems lėtiniu aktyviu hepatitu, antivirusiniai vaistai vartojami tik tada, kai HBeAg nustatomas kraujyje. HBeAg - antigenas - hepatito B viruso ūminės fazės ir replikacijos žymuo.
Nustatant HBe antigeną, tiriamas kraujo tyrimas:
Tyrimo rezultatų vertinimas
Tyrimo rezultatas išreiškiamas kokybiškai - teigiamas arba neigiamas. Neigiamas rezultatas rodo HBeAg serumo nebuvimą. Teigiamas rezultatas - HBeAg nustatymas rodo ūminio virusinio hepatito B inkubaciją arba ūminį periodą arba tęstinį viruso replikavimą ir paciento infekcinį poveikį.
Antikūnai hepatito B viruso antigenui "e" (anti-HBeAg)
Anti-HBeAg serume paprastai nėra. Anti-HBeAg antikūnų atsiradimas paprastai rodo intensyvų hepatito B viruso pašalinimą iš organizmo ir nedidelę paciento infekciją.
Šie antikūnai pasireiškia ūminiu laikotarpiu ir išlieka iki 5 metų po infekcijos. Lėtinio patvaraus hepatito atveju anti-HBeAg randamas paciento kraujyje kartu su HBsAg. Serokonversija, t.y. HBeAg perėjimas prie anti-HBeAg su lėtiniu aktyviu hepatitu, dažniau prognozuojamas, tačiau tas pats serokonversija nepagerina sunkios cirozės kepenų transformacijos prognozės.
Diagnozuojant virusinį hepatitą B, toliau išvardytais atvejais naudojami kraujo tyrimai dėl anti-HBeAg buvimo:
Tyrimo rezultatų vertinimas
Tyrimo rezultatas išreiškiamas kokybiškai - teigiamas arba neigiamas. Neigiamas rezultatas rodo, kad serume nėra antikūnų prieš HBeAg. Teigiamas rezultatas yra antikūnų prieš HBeAg aptikimas, kuris gali rodyti pradinį ūminio virusinio hepatito B etapą, ūminį infekcijos laikotarpį, ankstyvą atkūrimo stadiją, sveikimą, neseniai perduotą virusinį hepatitą B arba nuolatinį virusinį hepatitą B.
Lėtinio B hepatito buvimo kriterijai yra šie:
B hepatito viruso nustatymas pagal PGR (kokybiškai)
Paprastai nėra hepatito B viruso kraujyje.
Kokybinis hepatito B viruso nustatymas pagal PCR metodą kraujyje leidžia patvirtinti viruso buvimą paciento organizme ir taip nustatyti ligos etiologiją.
Šiame tyrime pateikiama naudinga informacija apie ūminio virusinio hepatito B diagnozavimą ligos inkubaciniame ir ankstyvajame vystymosi etape, kai gali nebūti paciento pagrindinių serologinių žymenų kraujyje. Serumo viruso DNR aptinkama 50% pacientų be HBeAg. PCR metodo analitinis jautrumas yra ne mažesnis kaip 80 virusų dalelių 5 μl, paskutinis DNR aptikimo mėginys, specifiškumas - 98%.
Šis metodas yra svarbus diagnozuojant ir stebint lėtinę HBV. Maždaug 5–10 proc. Cirozės ir kitų lėtinių kepenų ligų atvejų sukelia lėtinis hepatito B viruso nešiklis. Tokių ligų aktyvumo žymenys yra HBeAg ir hepatito B viruso DNR buvimas kraujyje.
PGR metodu galima nustatyti hepatito B viruso DNR kiekybiškai ir kokybiškai. Nustatytas fragmentas abiem atvejais yra hepatito B viruso struktūrinio baltymo geno unikali DNR seka.
B hepatito viruso DNR nustatymas biomaterialioje medžiagoje, naudojant PCR, yra būtinas:
B hepatito DNR išnykimas iš kraujo yra gydymo veiksmingumo požymis
B hepatito viruso nustatymas pagal PGR (kiekybinis)
Šis metodas suteikia svarbią informaciją apie ligos išsivystymo intensyvumą, gydymo veiksmingumą ir atsparumo aktyviems vaistams vystymą.
Nustatant viruso hepatitą PCR serume, naudojamos bandymo sistemos, kurių jautrumas mėginyje yra 50–100 kopijų, o tai leidžia aptikti 5 x 10 ^ 3 -10 ^ 4 kopijų / ml koncentraciją. PCR viruso hepatito B atveju būtinai reikalingas sprendžiant viruso replikaciją.
Serumo viruso DNR aptinkama 50% pacientų be HBeAg. Kraujo serumas, limfocitai ir hepatobiopija gali būti medžiaga, skirta aptikti hepatito B viruso DNR.
- Viremijos lygio įvertinimas yra toks:
- mažiau nei 2,10 ^ 5 kopijų / ml (mažesnė nei 2,10 ^ 5 TV / ml) - maža viremija;
- nuo 2,10 ^ 5 kopijų / ml (2,10 ^ 5 TV / ml) iki 2,10 ^ 6 kopijų / ml (8,10 ^ 5 TV / ml) - vidutinė viremija;
- daugiau kaip 2,10 ^ 6 kopijų / ml - didelė viremija.
Yra ryšys tarp ūminio virusinio hepatito B ir HBV DNR koncentracijos paciento kraujyje. Su mažu viremijos lygiu infekcijos chronizacijos procesas yra artimas nuliui, vidutinis procesas yra chronizuotas 25-30% pacientų, o esant aukštam viremijos lygiui, ūminis virusinis hepatitas B dažniausiai tampa lėtinis.
Lėtinės HBV interferono alfa gydymo indikacijos turėtų būti laikomos aktyvaus viruso replikacijos žymenimis (HBV HBV, HBeAg ir HBV DNR nustatymas kraujo serume per praėjusius 6 mėnesius).
Gydymo veiksmingumo vertinimo kriterijai yra HBEAg ir HBV DNR išnykimas kraujyje, kuris paprastai būna normalizuotas transaminazių kiekis ir ilgalaikis ligos atleidimas, HBV DNR išnyksta iš kraujo iki penktojo gydymo mėnesio 80% pacientų. Viremijos lygio sumažinimas 85% ar daugiau iki trečiosios dienos nuo gydymo pradžios, lyginant su pradiniu, yra greitas ir gana tikslus kriterijus, kaip prognozuoti terapijos veiksmingumą.
Virusinio hepatito tyrimas pagal IFE metodą
ELISA diagnozuojant virusinį hepatitą. Fermentų imuninės analizės galimybės
Specifinė virusinės hepatito laboratorinė diagnostika pagrįsta imunocheminių ir molekulinių biologinių tyrimų metodų taikymu. Pagrindiniai imunocheminiai metodai yra radioizotopai arba radioimunai (RIA) ir imunologiniai tyrimai (ELISA). Imunocheminiai diagnostikos metodai yra pagrįsti specifine antigeno sąveika - antikūnu, vėliau identifikavus kompleksą naudojant specialias etiketes. Dažniausias fermento imunologinis tyrimas.
Pirmieji pranešimai apie fermento imunologinio tyrimo naudojimą. kaip cheminių medžiagų nustatymo metodą 1971 m. vienu metu paskelbė dvi tyrimų grupės - B. Van Weemen, A. Schuurs ir E. Engvall, P. Perlmann. Fermento imunologinis tyrimas grindžiamas šiuo principu: kietoje fazėje, kuri daugiausia naudoja polistireno tabletės šulinių paviršių, yra užkrečiamas infekcinio agento arba antikūno (dažnai antikūnų mišinys) antigenas, kuris bus aptinkamas. Šis antigenas arba antikūnai, pritvirtinti prie kietos fazės, vadinami imunosorbentu.
Inkubavus imunosorbentą ir tiriamąjį serumą, kai aptinkamas agentas, jie yra prijungti prie antigeno-antikūno komplekso. Po plovimo procedūros, kurios metu pašalinami nesurišti antigenai ir antikūnai, atliekamas inkubavimas su konjugatu. Kaip konjugatas, skirtas HBsAg aptikti, naudojami anti-HBs, nustatant hepatito C viruso antikūnus - antikūnus prieš žmogaus imunoglobulinus (antivirusinę konjugatą), pažymėtą krienų peroksidaze. Dėl šio inkubavimo atsiranda prisijungimas prie jau egzistuojančių antigenų kompleksų - papildomai įvestos konjugato antikūnas. Pašalinus nesusietą konjugatą (plovimą), substratas patenka į šulinius. Naudojant peroksidazės konjugatą, vandenilio peroksidas naudojamas kaip substratas kartu su indikatoriumi, kuris dažniausiai naudojamas kaip ortofenilendiaminas (OPD) arba tetrametilbenzidinas (TMB). Rezultatas apskaičiuojamas fotometriškai.
Fermento imunologinio tyrimo metodo analitinių pajėgumų kokybei ir patikimumui būdingi keli kriterijai, įskaitant jautrumą, specifiškumą, tikslumą ir atkuriamumą.
Jautrumas yra minimalus medžiagos kiekis, kurį galima nustatyti fermento imunologiniu tyrimu. Šiuo atveju šio metodo jautrumo apatinė riba yra bandomosios medžiagos koncentracija mėginyje, kuris atitinka mažiausią teigiamą nustatymo rezultatą, kuris statistiškai reikšmingai skiriasi nuo sąmoningai neigiamų mėginių rodiklių. IFTS jautrumas priklauso nuo daugelio aplinkybių, susijusių tiek su bandymų sistemos konstrukcija (imunosorbento afinitetu, ekstrahavimo ir buferinių sistemų kokybe), tiek registracijos metodo skiriamuoju ir tikslumu.
Specifiškumas - gebėjimas tiksliai nustatyti komponentus, kurių nustatymui šis fermento imunologinis tyrimas yra skirtas. ELISA specifiškumą daugiausia lemia antikūnų arba antigenų (ty kompozicijos, naudojamos kaip imunosorbentas) kryžminė reakcija su glaudžiai susijusiais junginiais, taip pat inkubacinės terpės sudėtis (matricos efektas).
Teisingumas - to paties kontrolinio mėginio pakartotinių nustatymų rezultatų vidutinės vertės ir išmatuoto parametro tikrosios vertės atitiktis. ELISA nustatymo tikslumas priklauso nuo bandymo sistemos ir kontrolinio mėginio kokybės. Geros imuninės analizės sistemų teisingumo rodikliai yra 90-110%. Biomedicininių tyrimų ypatumas ELISA tyrime yra tai, kad neįmanoma nustatyti tikslios vertės, todėl tikroji vertė yra kelių ekspertų laboratorijų vidurkis. Statistinis teisingumo kriterijus yra aritmetinis vidurkis ir jo nuokrypio nuo tikrosios vertės laipsnis, išreikštas procentais.
Atkuriamumas - bandymo sistemos gebėjimas rodyti tas pačias vertes, pakartotinai tiriant tą patį mėginį. Atkuriamumas priklauso nuo atsitiktinių klaidų (klaidų) reakcijos procedūros metu ir nuo bandymų sistemų kokybės bei rezultatų registravimo metodo tikslumo. Manoma, kad tos pačios bendrovės tų pačių kontrolinių mėginių atkuriamumas skirtingose laboratorijose neturėtų viršyti 15% variacijos koeficiento vertės.
Yra keletas specifinių ELISA schemų virusinių hepatito žymenų nustatymui: a) tiesioginis fermento imunologinis tyrimas; b) netiesioginis fermento imunologinis tyrimas; c) konkurencinis slopinimas; c) „spąstai“ arba „surinkimo“ metodas.
Iš molekulinių biologinių metodų virusiniam hepatitui diagnozuoti dažniau naudojamos polimerazės grandinės reakcijos ir hibridizacijos. Šie metodai, ypač PCR, leidžia nustatyti labai mažus kiekius specifinės virusinės DNR arba RNR, taigi ir teisėjų replikaciją, o kai kuriais atvejais - replikacijos aktyvumą.
C hepatito kraujo tyrimas
Hepatitas C yra viena iš labiausiai paplitusių kepenų ligų, atsiradusių užsikrėtus hepatito C virusu (HCV), kuris patenka į organizmą pirmiausia, kai jis liečiasi su infekuoto asmens krauju. Pastebimas lėtinis ir ūminis C hepatitas: 70–80 proc. Pacientų, sergančių ūminiu hepatitu C, ligos simptomų nėra, tik kai kuriais atvejais po tam tikro laiko po infekcijos pasireiškia ligos požymiai, išreikšti nuovargiu, pilvo skausmu, apetito praradimu, tamsėjimu šlapimas, vėmimas, pykinimas, išmatos, gelta, sąnarių skausmas. Paprastai simptomai pasireiškia 6-7 savaites po infekcijos, tačiau ligos požymių trukmė svyruoja nuo 2 savaičių iki šešių mėnesių. Jei pasireiškia pirmiau minėti simptomai, reikia pasikonsultuoti su infekcinių ligų gydytoju ir atlikti kraujo tyrimą hepatitui C. Laiku atliktas hepatito diagnozavimas gali aptikti ligą ankstyvosiose stadijose ir gerokai padidinti atsigavimo galimybes.
Kai planuojamas hepatito C tyrimas
Situacijos, kai reikia atlikti hepatito C tyrimą:
- nėštumo ir šeimos planavimo metu;
- pacientams, sergantiems lėtiniu ar ūminiu hepatitu;
- asmeniui gresia pavojus. Tai yra medicinos darbuotojai, kalėjime esantys asmenys, teisėsaugos pareigūnai, žmonės, vartojantys narkotikus, turi daug seksualinių partnerių, turi AIDS, yra hemodializuojami ir kiti.
Pasirengimas C hepatito analizei
Specialaus pasirengimo hepatito C analizei nereikia. Analizei kraujas paimtas iš venų tuščiu skrandžiu, tuo pačiu metu praėjus ne mažiau kaip aštuonias valandas po paskutinio valgio.
C hepatito ELISA tyrimai
Pirmoji analizė, paprastai nustatyta hepatito C - ELISA testo diagnozei (imunosorbentinis tyrimas). C hepatito ELISA tyrimai leidžia nustatyti hepatito C viruso (anti-HCVAb) antikūnų buvimą kraujyje. Jei ELISA testo rezultatas yra teigiamas, tai rodo, kad organizmas yra kontaktas su hepatito C virusu, tačiau 40% žmonių, turinčių teigiamą ELISA, viruso neaptinka kraujyje. Šis reiškinys vadinamas klaidingu teigiamu rezultatu. Be to, ELISA pagalba tikrinamas donoro kraujas.
C hepatito RIBA
C hepatito RIBA analizė naudojama teigiamam ELISA rezultatui patvirtinti. Rekombinantinis imunoblotinis metodas (RIBA) yra tikslesnis antikūnų prieš hepatito C virusą tyrimas, o hepatito C viruso buvimas organizme taip pat nenustato teigiamo rezultato, bet tik patvirtina antikūnų buvimą.
C hepatito PCR tyrimai
Siekiant nustatyti hepatito C virusų buvimą kraujyje (HCV RNR) ir diagnozuoti, jie dažniausiai naudoja polimerazės grandinės reakcijos (PCR) metodą. Šiame tyrime galima tiksliai nustatyti net mažo viruso kiekio kraujyje buvimą. C hepatito PCR analizė gali atskleisti viruso buvimą jau praėjus 5 dienoms po infekcijos, ilgai prieš antikūnų atsiradimą. Kai PCR analizės rezultatas yra teigiamas, tai reiškia aktyvios infekcijos buvimą.
Yra tokių PCR analizės variantų:
- kiekybinis PCR, kuris leidžia nustatyti ne tik viruso buvimo faktą, bet ir viruso kiekį (viruso kiekį). Šis rodiklis labai svarbus nustatant gydymo veiksmingumą;
- genotipų nustatymas, nustatantis hepatito C viruso genotipą, kuris yra svarbus nustatant gydymo trukmę ir taktiką. Yra daugiau nei 10 hepatito C viruso genotipų, tačiau klinikinėje praktikoje pakanka apibrėžti penkis iš labiausiai paplitusių tipų: 1a, 1b, 2,3a / 3b.
Atlikta kiekybinė PGR analizė:
- su kokybiniu teigiamu C hepatito viruso RNR buvimu serume;
- tiksliai įvertinti gydymo veiksmingumą;
- nustatyti paciento gydymo taktiką.
Nėra tiesioginio ryšio tarp hepatito C sunkumo ir viruso kiekio kraujyje. Viruso koncentracija turi įtakos ligos užkrečiamumui, ty kuo didesnis viruso kiekis paciento kraujyje, tuo didesnė viruso perdavimo rizika, pvz., Per lytinį ryšį arba iš motinos į vaiką. Be to, gydymo veiksmingumas priklauso nuo viruso koncentracijos. Gydymo metu palankus veiksnys yra maža virusinė apkrova, o labai didelis - nepalankus.
Genotipų analizė atliekama:
- su kokybiniu teigiamu C hepatito viruso RNR buvimu serume;
- tiksliai įvertinti gydymo veiksmingumą;
- nustatyti paciento gydymo taktiką;
- numatyti infekcinio proceso chronizaciją;
- nustatyti ligos progresavimą.
Nustatant gydymo trukmę, labai svarbu nustatyti viruso genotipą, kuris yra svarbus, nes interferonas turi platų šalutinių poveikių spektrą ir mažą paciento toleranciją.
C hepatito dekodavimo analizė
Paprastai viruso RNR, jų antikūnai ir antigenai visiškai nėra. Antikūnų buvimas kraujyje rodo, kad yra lėtinis arba ūminis C hepatitas arba atsigavimo laikotarpis. Jei HCV RNR yra kraujyje, kuri nustatoma pagal PCR analizę, tai rodo viruso buvimą kraujyje.
Netinkamai atlikus bandymo metodą, transportavimo ir kraujo pakitimus, PCR analizė kartais gali rodyti klaidingus teigiamus rezultatus. ELISA ir RIBA analizė ankstyvosiose ligos stadijose, kai organizmas dar nesukėlė pakankamo antikūnų kiekio, gali rodyti klaidingą neigiamą rezultatą.
Jei, išaiškinant hepatito C testą, gaunami teigiami rezultatai, reikia kreiptis į infekcinės ligos gydytoją ir gastroenterologą tolesniam diagnozavimui ir gydymui.
Segmentuoti neutrofilai nuleisti
Vaiko trombocitai yra normalūs, pakilę, nuleisti
Skydliaukę stimuliuojantis hormonas TGT
Hepatito diagnozė
Negalima iš karto nustatyti hepatito buvimo organizme, nes ligos inkubacinis laikotarpis gali trukti iki keturių savaičių. Kai atsiranda pirmieji ligos požymiai, paveiktame organizme atsiranda radikalūs kraujo sudėties pokyčiai: biocheminė analizė rodo rimtą sveikatos problemą ir patogeninį virusą. Tačiau, norint atlikti galutinę diagnozę, nepakanka dovanoti kraują hepatitui, taip pat išsamią hepatito diagnozę.
Laboratorinė hepatito diagnostika
Pageidautina, kad jis būtų atliktas pasibaigus inkubacijos laikotarpiui, kad gydytojas, turintis didžiausią tikslumą, galėtų nustatyti kūno liga, esanti organizme. Priešingu atveju, nustatytas gydymas neduos norimo gydomojo poveikio ir netgi padidins vyraujančią klinikinę nuotrauką.
A hepatito diagnostika
Paprastai hepatito A diagnozė prasideda nuo išsamaus paciento apklausos ir kelių testų, kuriuos reikia atlikti kuo greičiau, paskyrimas. Tai yra:
- biocheminis kraujo tyrimas;
- pilnas kraujo kiekis;
- PCR metodas;
- ELISA;
- koagulograma.
Jei Botkin liga progresuoja, po biocheminių kraujo analizės rezultatų stebimas nenormalus bilirubino, AlAT ir AsAT šuolis. Be to, gaminami specifiniai anti-HAV IgM, kurie yra neabejotinas hepatito A buvimas.
Apskritai kraujo analizę lemia leukocitų nuosmukis, šuolis ESR ir limfocitozė. Vis dėlto patikimiausias yra PCR metodas, kuris lemia patogeninio viruso RNR rodiklį.
Be to, gydytojas tiria ligos simptomus, po to gali atlikti galutinę diagnozę ir išspręsti veiksmingiausią gydymą. Instrumentinių egzaminų poreikis yra labai retas. Po sėkmingo konservatyvaus gydymo paciento hospitalizavimo ir karantino sąlygomis, galutinis atsigavimas laukia, o A hepatitas dar kartą nepasikartoja.
B hepatito diagnostika
Norint nustatyti hepatito B viruso buvimą, taip pat galima pagal laboratorinių tyrimų rezultatus, todėl pirmas dalykas yra būtinas kraujui paaukoti hepatitu. Dėl patogeninio viruso yra trys pagrindiniai antigenai - HBsAg, HBcAg ir HBeAg, kuriems organizme gaminami antikūnai. Pagrindinis šio klinikinio vaizdo bruožas yra ELISA - ELISA, kuri tik atskleidžia specifinius hepatito B žymenis.
Nedelsiant reikia paaiškinti, kad antigenas HBsAg pasireiškia kraujyje net prieš pirmuosius hepatito simptomus ir yra patikimai nustatomas lediniu laikotarpiu. Tačiau neigiamas testas neatmeta hepatito B buvimo, todėl reikia naudoti vienodai veiksmingą polimerazės grandinės reakcijos (PCR) metodą.
Jei įtariate, kad B hepatitas yra privalomas, tai yra biocheminis kraujo tyrimas, kurį rekomenduojama atlikti pirmoje vietoje. Atskirai aptariamas kepenų biopsijos ir peritoninių organų ultragarso tyrimas, tačiau kai ligos istorija yra labai aiški, klinikinio tyrimo metodų nereikia.
Kepenų echograma autoimuniniame hepatitu lėtinio hepatito stadijoje
C hepatito diagnozė
Siekiant diagnozuoti, nepakanka kraujo paaukoti hepatitui, nes virusas gali dominuoti kūno pavidalu. Nepaisant to, pagrindiniai laboratoriniai tyrimai yra visos pateiktos analizės, taip pat papildomos kepenų biopsijos charakteristikos. Šis mikroskopinis biologinės medžiagos tyrimas (mūsų atveju - kepenų audinio gabalas) lemia patologinio proceso ir audinių fibrozės mastą. Medžiagos mėginių ėmimas atliekamas pagal vietinį anestetiką, tokios procedūros komplikacijos yra labai retos medicinos praktikoje.
Jei įtariamas hepatitas C, pagrindinis klinikinio tyrimo metodas yra peritoninių organų ultragarsas. Priežastis yra paprasta: liga dažnai pasireiškia regimojo paveiktų kepenų pokyčiais, jo struktūros ir dydžio pokyčiais. Tokiu būdu galite nustatyti:
- kepenų, blužnies, kasos ir tulžies pūslės dydis;
- patologiniai šių organų pokyčiai;
- bendras kraujo tekėjimas peritoniniuose organuose;
- optimali vieta kepenų biopsijai atlikti.
Šis klinikinio tyrimo metodas nustato visas organo židinio patologijas mikroskopiniame lygmenyje. Jei kepenys yra vaizduojami pilkoje skalėje, reikalinga skubi biopsija, nes pilka spalva vaizduoja paveiktus „žmogaus filtro“ audinius.
Hepatito prevencija
Kadangi liga savaime nepasireiškia, toli gražu ne visi klinikiniai paveikslai, kurie nedelsiant gydomi. Pacientas gali tiesiog nežino apie patogeninio viruso buvimą organizme, kuris savo ruožtu sparčiai plinta į kraują ir užkrečia sveikus kepenų ląsteles.
Siekiant išvengti tokio tragiško likimo, rekomenduojama laikytis visų prevencinių priemonių. Toks budrumas gerokai sumažins sergamumo riziką ir išgelbės jus nuo rimtų sveikatos problemų ateityje. Toliau pateikiamos pagrindinės prevencijos taisyklės:
- nusiplaukite rankas po gatvės;
- aukštos kokybės šviežių daržovių ir vaisių perdirbimui;
- atlikti visus prevencinius skiepus, nurodytus metiniame kalendoriniame plane;
- selektyvus požiūris į seksualinius partnerius;
- išvengti kontakto su sergančiais žmonėmis;
- naudoti tik vienkartinius švirkštus ir būkite ypač budrūs kraujo perpylimo stotyse.
Taip pat rekomenduojama reguliariai (kartą per šešis mėnesius) paaukoti kraują hepatitui, kad įsitikintumėte, jog virusas neprasiskverbia į organizmą ir nepažeidžia sveikų kepenų ląstelių. Jei diagnozė nustatoma, būtina nedelsiant tapti gydytojo paskyra ir laikytis visų specialisto rekomendacijų.
Leidinio autorius:
Syropyatov Sergejus Nikolajevas
Išsilavinimas: Rostovo valstybinis medicinos universitetas (Rostovo valstybinis medicinos universitetas), Gastroenterologijos ir endoskopijos katedra.
Gastroenterologas
Medicinos mokslų daktaras