Baltojo kraujo ląstelių skaičiaus skaičiavimas

Principas Leukocitų skaičiavimas mikroskopijos metu tam tikru skaičiavimo kameros kvadratų skaičiumi ir jų skaičiaus apskaičiavimas 1 litro kraujo, atsižvelgiant į kraujo praskiedimą ir skaičiavimo kameros tūrį.

Reagentas: 3-5% acto rūgšties tirpalo, tamsintas dažytiems leukocitų branduoliams su keliais lašais metileno mėlynojo tirpalo. Tirpalas yra mėlynos spalvos, gali būti laikomas ilgą laiką.

Nustatymo eiga. Į sausą bandomąjį mėgintuvėlį supilkite 0,4 ml acto rūgšties tirpalo. Iš piršto surenkama 0,02 ml kraujo (galite naudoti antikoagulianto stabilizuotą venų kraują). Nuvalykite pipetės antgalį, tada išpurškite kraują iš mėgintuvėlio dugno, sumaišykite, iš naujo surinkite ir išpurškite kraujo ir reagento mišinį (pipetę). Ženklinkite mėgintuvėlį ir palikite jį iki skaičiavimo. Laikyti kraujo mišinį su acto rūgšties tirpalu rekomenduojama ne ilgiau kaip 2–4 valandas.

Kraujo tirpalas praskiedžiamas acto rūgštimi, kruopščiai sumaišomas ir užpildomas skaičiavimo kamera. Užpildyta kamera paliekama horizontalioje padėtyje 1 min., Kad nusodintų baltųjų kraujo kūnelių. Keičiant fotoaparato horizontalią padėtį, jie įdedami į mikroskopo stalą ir mažu didinimu (okuliaras 10 ×, objektyvas 8 ×) skaičiuoja baltus kraujo kūnus 100 didelių kvadratų, kurie atitinka 1600 mažų.

Siekiant didesnio tikslumo, leukocitai skaičiuojami per tinklelį dideliuose kvadratuose, neskirstytuose į mažus kvadratus ir juosteles, pradedant nuo viršutinio kairiojo tinklo kampo. Norėdami geriau kontrastuoti, patamsinkite matymo lauką, nuleiskite kondensatorių ir uždarykite diafragmą. Skaičiuojamos kvadrato viduje esančios ir ant bet kurios dvi linijos esančios ląstelės, kad nebūtų skaičiuojamas tas pats langelis du kartus.

Leukocitų skaičiavimas atliekamas pagal formulę:

kur X yra leukocitų skaičius 1 μl kraujo; ir - leukocitų skaičius 100 didelių kvadratų; 20 - kraujo skiedimas; 100 yra didelių kvadratų skaičius; 250 yra 1 μl konversijos koeficientas, nes vieno didelio kvadrato tūris yra 1/250 μl (kvadrato pusė yra 1/5 mm, aukštis 1/10 mm).

Praktiškai, norint apskaičiuoti leukocitų skaičių 1 μl kraujo, jų skaičius 100 didžiųjų kvadratų padauginamas iš 50, o 1 litre - gauta vertė dauginama iš 106.

Pastaba Skaičiuojant leukocitus, 6-8% atvejų klaida yra neišvengiama.

  1. Kadangi periferiniame kraujyje yra daug normocitų, jie skaičiuojami pagal leukocitų (tiek leukocitų, tiek normocitų - branduolinių ląstelių) skaičių. Siekiant tinkamai nustatyti leukocitų skaičių, iš bendro branduolinių kraujo ląstelių skaičiaus turėtų atimti normocitų skaičių.
  2. Likusios klaidos yra panašios į tas, kurios atsiranda apskaičiuojant raudonųjų kraujo kūnelių skaičių skaičiavimo kameroje.

Leukocitų skaičius

Norėdami surinkti kraują leukocitų maišytuve iki 0,5. Nedelsiant į kraują įpilkite 3% acto rūgšties praskiedimo tirpalą iki 11 ženklo. Kruopščiai sumaišykite kapiliarą ir papildykite Goryaev kamerą. Skaičiuojama mažiausiai 100 didelių kvadratų. Tai yra didelės nepadengtos linijos, kurios Goryaev fotoaparato tinklelyje yra suskirstytos į keturias. Apskaičiuokite leukocitų skaičių 1 l kraujo pagal formulę:

L = N x 4000 x 20 x 10 6

kur: N yra leukocitų skaičius šimtu didelių kvadratų; 4000 - daugiklis, mažinantis mažo kvadrato tūrį iki 1 μl kraujo tūrio; 20 - kraujo skiedimo laipsnio korekcija; 1600 - leukocitų skaičius mažuose kvadratuose; 10 6 - mikrolitų skaičius 1 l.

Rekomendacijos registracijai

Apibendrinant, palyginkite gautus rezultatus su normaliomis vertėmis.

Laboratorijos Nr. 7.3

Nustatomas hemoglobino kiekis kraujyje

194.48.155.245 © studopedia.ru nėra skelbiamų medžiagų autorius. Bet suteikia galimybę nemokamai naudotis. Ar yra autorių teisių pažeidimas? Rašykite mums | Atsiliepimai.

Išjungti adBlock!
ir atnaujinkite puslapį (F5)
labai reikalinga

Baltojo kraujo ląstelių skaičiaus skaičiavimas

Leukocitozė gali būti absoliuti (tiesa) ir santykinė (perskirstymo).

Absoliutinė leukocitozė stebima ūminiuose uždegiminiuose procesuose, audinių nekrozėje, ūminėse bakterinėse infekcijose (išskyrus vidurių šiltinės, bruceliozės, tularemijos ir kt.), Alerginių ligų, piktybinių navikų (su audinių naikinimu), uždarytų galvos traumų ir hemoragijų smegenyse, diabetu. ureminė koma, šokas, ūminis kraujo netekimas, kaip pirminė reakcija - su radiacine liga. Esant leukemijai, žymiai padidėja leukocitų skaičius.

Santykinis (perskirstymo) yra leukocitų gavimo iš kraujo srauto iš organų, kurie tarnauja jos depo. Jis pasireiškia po valgymo (maisto leukocitozės), karšto ir šalto vonios, stiprios emocijos (vegetovaskulinė leukocitozė), intensyvus raumenų darbas (miogeninė leukocitozė) ir tt

Leukopenija Leukopenija laikoma kaulų čiulpų funkcinio gebėjimo slopinimu, kurį sukelia toksinės medžiagos (arsenas, benzenas ir kt.), Kai kurie vaistai (sulfanilamidai, chloramfenikolis, butadionas, imuninė, ciklofosfamidas ir kt.), Virusai (gripas, virusinis hepatitas). tymų ir kt.), mikrobų (vidurių šiltinės, bruceliozės ir kt.), jonizuojančiosios spinduliuotės, rentgeno spindulių ir hipersplenizmo (padidėjusios blužnies funkcijos).

Leukocitozei ir leukopenijai retai būdingas proporcingas visų tipų leukocitų skaičiaus padidėjimas (sumažėjimas) (pvz., Leukocitozė su kraujo sutirštinimu); daugeliu atvejų yra padidėjęs (sumažėjęs) bet kurio tipo ląstelių skaičius, todėl vartojami terminai "neutrofilija", "neutropenija", "limfocitozė", "limfopenija", "eozinofilija", "eozinopenija", "monocitozė", "monocitopenija"., "Basofilija".

Atliekant leukocitų skaičiaus pokyčių klinikinį įvertinimą, labai svarbus procentas yra atskirų leukocitų, ty leukocitų formulės, procentinis santykis.

Sveiko žmogaus leukocitų kiekis kraujyje:

Santykinė suma Absoliuta suma

Bazofilai ……………………….0-1% 0-0.0650 x 10 9 / l

Eozinofilai …………………….0,5-5% 0,02-0,30 x 10 9 / l

Neutrofilai: - mielocitai............. 0%

- nuskustas... 1-6% 0,040-0,300 x 10 9 / l

- segmentuotas….47-72% 2,0-5,5 x 10 9 / l

Limfocitai …………………………….19-37% 1,2-3,0 x 10 9 / L

Monocitai ……………………….3-11% 0,09-0,6 x 10 9 / L

Leukocitų skaičiavimas atliekamas dažytomis periferinio kraujo tepinėlėmis. Norint teisingai interpretuoti leukocitų formulės tyrimo rezultatus, rekomenduojama skaičiuoti absoliučiais kiekiais, bet ne santykiniais. Dažniausiai pasitaikantys Romanovsky-Giemsa, Pappenheimo tapybos metodai. Panardinus, skaičiuojama mažiausiai 200 ląstelių, o tada gaunamas tam tikrų tipų leukocitų procentinis santykis. Leukogramos analizė, atsižvelgiant į kitus kraujo parametrus ir klinikinį vaizdą, yra vertingas tyrimo metodas, jis padeda diagnozuoti ir nustatyti ligos prognozę.

Pagrindinės neutrofilijos priežastys.

Ūminės bakterinės infekcijos - lokalizuotos ir apibendrintos.

Audinių uždegimas arba nekrozė.

Vaistų poveikis (kortikosteroidai).

Pagrindinės neutropenijos priežastys.

Infekcijos - bakterinė (vidurių šiltinė, bruceliozė, tularemija, paratifoidinis karščiavimas) ir virusas (infekcinis hepatitas, tymai, gripas, raudonukė ir kt.).

Miototoksinis poveikis ir granulocitopoezės slopinimas (jonizuojančioji spinduliuotė; cheminiai veiksniai - benzenas, anilinas, DDT; vaistinis poveikis - citostatikai ir imunosupresantai; vitaminas B;12-folio rūgšties trūkumo anemija, ūminė aleukeminė leukemija, aplastinė anemija).

Antikūnų ekspozicija (imuninės formos) - padidėjęs jautrumas vaistams, autoimuninės ligos (SLE, reumatoidinis artritas, lėtinė limfinė leukemija), izoimuninės apraiškos (naujagimio hemolizinė liga).

Perskirstymas ir nusėdimas organuose - šoko sąlygos, ligos, turinčios splenomegalia ir hipersplenizmas.

Paveldimos formos (šeiminė gerybinė lėtinė neutropenija).

Pagrindinės eozinofilijos priežastys.

Parazitinės invazijos (trichinozė).

Lėtiniai odos pažeidimai - psoriazė, pemphigus, egzema.

Navikai (eozinofiliniai leukemijos variantai).

Kitos ligos - fibroplastinis endokarditas Lefflera, skarlatina.

Infekcijų ir uždegiminių ligų atkūrimo fazėje (palankus prognozinis ženklas).

Eozinopenijos (aneozinofilijos) priežastys.

Padidėjęs adrenokortikosteroidų aktyvumas organizme.

Pagrindinės bazofilijos priežastys:

Lėtinė mieloidinė leukemija ir eritremija.

Pagrindinės monocitozės priežastys.

Subakutinės ir lėtinės bakterinės infekcijos.

Parazitinės infekcijos - leishmaniasis, maliarija.

Hemoblastozė - monocitinė leukemija, limfogranulomatozė, limfomos.

Kitos sąlygos yra SLE, sarkoidozė, reumatoidinis artritas, infekcinė monocitozė; po splenektomijos atsigaunant nuo infekcijų, paliekant agranulocitozę.

Monocitų skaičiaus sumažėjimas yra svarbus vertinant limfocitų monocitinį santykį plaučių tuberkulioze.

Pagrindinės limfocitozės priežastys.

Infekcijos - ūminė virusinė (infekcinė mononukleozė, tymų, raudonukės, vėjaraupiai), lėtinė bakterinė (tuberkuliozė, sifilis, bruceliozė), pirmuonis (toksoplazmozė).

Hemoblastozė (limfocitinė leukemija, limfoma).

Kitos ligos - hipertirozė, Adisono liga, vitaminas B12-folio trūkumo anemija, hipo ir aplastinė anemija.

Limfocitopenija stebima SLE, Hodžkino liga, plačiai paplitusi limfmazgių tuberkuliozė, inkstų nepakankamumo galutinis etapas, ūminė spinduliuotės liga, imunodeficito būsenos, vartojant gliukokortikoidus.

Tam tikrų tipų leukocitų kiekio kraujyje padidėjimas arba sumažėjimas gali būti santykinis arba absoliutus. Jei pasikeičia tik tam tikro tipo baltųjų kraujo kūnelių kiekis, tada atsiranda santykinė neutrofilija, santykinė eozinopenija ir kt. Absoliutus bet kokio tipo leukocitų kiekis, t. Y. Šių ląstelių kiekis viename tūrio vienete, padidėjimas arba sumažėjimas vadinamas absoliučia neutrofilija, absoliučia eozinopenija ir kt.

Formulės perkėlimas į kairę (didinant jaunų neutrofilų formų skaičių) yra uždegimo arba nekrotinio proceso požymis organizme.

Leukocitų formulės poslinkis dešinėje yra būdingas radiacinei ligai ir B vitaminui12-folio rūgšties trūkumo anemija.

Visų tipų granuliuotų leukocitų - granulocitų (neutrofilų, eozinofilų, bazofilų) nebuvimas ar reikšmingas sumažėjimas žymimas terminu agranulocitozė. Priklausomai nuo atsiradimo mechanizmo, išskiriami mielotoksiniai (jonizuojančiosios spinduliuotės, citostatinio suvartojimo) ir imuninės sistemos (hapeno ir autoimuninės agranulocitozės).

Leukocitų skaičius

Skaičiavimo metodas fotoaparate. Vamzdžių metodu gaunamas kraujas ir skiedimas. Į mėgintuvėlį įpilama 0,4 ml skiediklio skysčio ir 0,02 ml kapiliarinio kraujo (pageidautina Vidalevskaya). Gautas praskiedimas praktiškai laikomas 1:20: 3-5% etilo rūgšties tirpalo, dažyto metileno mėlyną, paprastai naudojamas kaip skiediklis (acto rūgšties lizės eritrocitai, metileno mėlynas dėmes su leukocitų branduoliais). Prieš užpildant kamerą, Goryaeva mėgintuvėlis su praskiestu krauju yra kruopščiai pakratomas. Kamera pripildoma taip pat, kaip ir raudonųjų kraujo kūnelių skaičiavimas.

Leukocitai yra daug mažesni nei eritrocitai (nuo 1 iki 2 didelių kvadratų), todėl, siekiant tikslumo, skaičiavimai atliekami 100 didelių kvadratų (nesurūšiuoti). Skaičiavimas: 100 didelių kvadratų (1600 mažų) skaičiuojami kaip leukocitai.
Nepamirštant, kad mažo kvadrato tūris yra 1/4000 mm3, o kraujas yra praskiedžiamas 20 kartų, skaičiuojamas leukocitų skaičius 1 μl kraujo: 4000 20 ir padalintas iš 1600 = a x 1/2. Praktiškai, norint gauti faktinį leukocitų kiekį 1 μl kraujo, pakanka padalinti į pusę skaičiaus gauto skaičiaus ir pridėti 2 nulius. Vidutinė metodo klaida yra ± 7%.

Tikslesnis (2-3% klaida) ir tobulas yra leukocitų skaičius naudojant elektroninius prietaisus. Leukocitų skaičiavimas kietųjų dalelių skaitikliai atliekamas pagal tą patį principą kaip ir eritrocitai. Išankstinis kraujas praskiedžiamas ir sumaišomas su bet kokiais raudonųjų kraujo ląstelių tirpikliais. „Technicon“ autoanalizatoriuje naudojamas kaip acto rūgšties tirpalas „Culter“ ir „Celloskop“ prietaisuose - saponinas arba sapoglobinas, kuris yra atskiestas (1: 500, 1: 700) izotoniniu natrio chlorido tirpalu (6 lašai 20 ml) veisimas).

Kraujo leukocitų skaičiavimas atliekamas dažytomis periferinio kraujo tepinėlėmis.
Geriau skaičiuoti nuo ploniausio taško, esančio netoli tepinėlės pabaigos, bent 200 ląstelių (išskyrus ryškią leukopeniją), o tada nustatyti tam tikrų tipų baltųjų kraujo kūnelių procentinį santykį. Skaičiavimas yra rekomenduojamas ta pačia tvarka: pusė ląstelių turi būti skaičiuojama viršutinėje pusėje, pusė insulto apačioje, nesikreipiant į pačią kraštą ir vidurį, zigzagavimas (3-4 regėjimo laukai išilgai insulto, 3-4 laukai stačiu kampu iki insulto vidurio) tada 3-4 laukus į šoną, lygiagrečią su kraštu, vėl stačiu kampu į viršų ir pan. į vieną pusę).

Tepalų paruošimas. Atsargiai nuplaunamas ir riebaluotasis stiklas (jo kraštas) liečia injekcijos vietą. Tepimas daro šlifavimo stiklą, įdėjus jį 45 ° kampu į stiklą prieš lašas. Atnešę stiklą į šį lašą, jie laukia, kol kraujas plečiasi išilgai jo krašto, tada greitai judant jie atlieka šlifavimo stiklą į priekį.

Tinkamai išteptas tepalas turi gelsvos spalvos (plonas), nepasiekia stiklo kraštų ir baigiasi pėdsakais (ūsai).

Sausų tepalų dažymas, susidaręs po preliminarios fiksacijos. Geriausias fiksavimas pasiekiamas absoliučiu metileno alkoholiu (3-5 min.) Arba Nikiforov mišinyje, kuriame yra lygios absoliučios etanolio ir eterio dalys (30 minučių).

Pagrindiniai hematologiniai dažai yra metileno mėlynas ir jo darinys - azure I (metileno žydras) ir azure II (vienodų Azure I ir metileno mėlynųjų dalių mišinys) iki rūgštinės vandenyje tirpios geltonosios eozino.

● Romanovsky-Giemsa tapyba. Romanovsky-Giemsa dažai (gamykloje pagaminti) yra tokie: Azur II - 3 g, vandenyje tirpus geltonas eozinas - 0,8 g, metilo alkoholis - 250 ml ir glicerinas - 250 ml. Darbinis dažų tirpalas paruošiamas 1,5-2 lašų galutinio dažų 1 ml distiliuoto vandens. Dažai pilami į tepinėlį su galbūt aukštesniu sluoksniu; dažymo laikas - 30-35 min Po šio laikotarpio tamponai plaunami vandeniu ir džiovinami ore. Šiuo metodu galima gerai atskirti branduolį, tačiau neutropilinis citoplazmos granuliacija yra daug blogesnė, todėl jis plačiai naudojamas periferiniam kraujo tepimui.

● Kombinuotas May-Grunwald-Romanovsky-Giemsa dažymas pagal Pappenheimą. Gautas dažiklis, gegužės-Grunwaldo fiksatorius, kuris yra eozinmetileno mėlynojo tirpalo metileno alkoholyje tirpalas, pipetuojamas ant fiksuoto tepalo 3 minutes. Po 3 minučių į tirpalą dengiantį dažą pridedamas vienodas kiekis distiliuoto vandens, o dažymas tęsiamas dar 1 minutę. Po to dažai nuplaunami ir tepalas išdžiovinamas ore. Tada išdžiovinti tepinėliai perpilami šviežiai paruoštu vandeniniu Romanovsky dažų tirpalu 8-15 minučių. Šis metodas laikomas geriausiu, ypač tepinėliams, kuriuose yra čiulpų.

Leukocitų skaičiaus padidėjimas periferiniame kraujyje virš normalaus lygio vadinamas leukocitoze, sumažėjimas vadinamas leukopenija. Leukocitozei (leukopenijai) retai būdingas proporcingas visų rūšių leukocitų skaičiaus padidėjimas (sumažėjimas), pavyzdžiui, leukocitozė su kraujo sutirštėjimu. Daugeliu atvejų padidėja bet kurio tipo ląstelių skaičius (sumažėjimas). Atskirų tipų leukocitų kiekio kraujyje padidėjimas arba sumažėjimas gali būti santykinis arba absoliutus, priklausomai nuo bendro leukocitų skaičiaus - normalus, padidėjęs arba sumažėjęs. Leukocitų skaičiaus, individualių formų ir morfologijos santykio pokytis priklauso nuo patogeno tipo ir virulentiškumo, patologinio proceso pobūdžio, eigos ir apimties, individualios organizmo reakcijos.

Leukocitai (leucocytus)

Leukocitai. Leukocitų kiekybinis nustatymas. Leukocitų skaičiavimas naudojant kamerą Goryaeva. Kiekybinis leukocitų kiekis. Leukocitozė.

Baltųjų kraujo kūnelių

Leukocitų kiekis kraujyje priklauso nuo jų susidarymo greičio ir nuo jų mobilizacijos iš kaulų čiulpų, taip pat nuo jų panaudojimo ir migracijos į audinius (į pažeidimus), plaučių ir blužnies paėmimo. Šiuos procesus savo ruožtu įtakoja daugybė fiziologinių veiksnių, todėl leukocitų skaičius sveiko žmogaus kraujyje svyruoja: jis pakyla iki dienos pabaigos, fizinio krūvio metu, emocinis stresas, baltymų maisto vartojimas ir staigūs aplinkos temperatūros pokyčiai.

Leukocitų kiekybinis nustatymas

Leukocitai skaičiuojami naudojant „Goryaev“ kamerą ir naudojant automatinius skaitiklius.

Leukocitų skaičiavimas naudojant kamerą Goryaeva

In vitro metodas leukocitų skaičiavimui:

  • Į mėgintuvėlį pilamas 0,4 ml 3-5% acto rūgšties tirpalo, padengto metileno mėlyną. Naudokite kapiliarinę pipetę 20 μl kraujo traukimui iš šviežio lašelio (praskiedimo 20 kartų), atsargiai jį išpurškite į mėgintuvėlį reagentu ir išplaukite pipetę. Gerai išmaišykite;
  • švarus ir sausas stiklas patenka į kamerą taip, kad kontaktiniame taške susidarytų vaivorykštės žiedai;
  • kraujo tirpalas praskiedžiamas mėgintuvėlyje, gerai išmaišykite. Apvalaus stiklo strypo galas užima vieną lašą kraujo ir patenka į poliruoto kameros stiklo kraštą;
  • užpildžius kamerą, jis paliekamas 1 min. ramybėje leukocitų nusėdimui;
  • Leukocitai laikomi mažu didinimu (objektyvas × 8 arba × 9, okuliaras × 10 arba × 15) su tamsiu matymo lauku (su sumažintu kondensatoriumi arba susiaurėjusia diafragma);
  • patenkinamų rezultatų leukocitai skaičiuojami 100 didelių kvadratų.

Žinant didelio kvadrato tūrį ir kraujo praskiedimo laipsnį, suraskite leukocitų skaičių 1 μl ir 1 l kraujo. Didelės aikštės pusė yra 1/5 mm, plotas yra 1/25 mm2, erdvės tūris virš šio kvadrato yra 1/250 mm3.

Baltųjų kraujo kūnelių skaičiavimo formulė:

kur B yra leukocitų skaičius 100 didelių kvadratų;
P - praskiedimo laipsnis (20).

Leukocitų skaičius

Standartas: 4,0–9,0 × 10 9 / L

Skambinama leukocitų, viršijančių 9,0 × 10 9 / l, skaičius
leukocitozė, jų skaičiaus sumažėjimas mažesnis nei 4,0 × 10 9 / l - leukopenija. Tačiau net 3,5 × 10 9 1 l leukocitų daugeliui asmenų gali būti norma. Remiantis literatūra, tokie žmonės turi didesnį atsparumą imunitetui ir yra mažiau linkę susirgti, o tai atrodo dėl to, kad reikia imuninio atsako į leukocitų rezervą audiniuose, kuriuose yra 50–60 kartų daugiau nei kraujyje. Akivaizdu, kad sveikų asmenų, kuriems periferiniame kraujyje yra mažas baltųjų kraujo kūnelių kiekis, jų atsargos audiniuose atitinkamai padidėja. Šis reiškinys paaiškinamas paveldimu ir šeimos pobūdžiu arba padidėjusiu parazimpatinės nervų sistemos poveikiu.

Leukopenija gali būti funkcionali ir ekologiška.
Funkcinė leukopenija yra susijusi su kraujo formavimosi reguliavimu ir stebima:

  • kai kurios bakterinės ir virusinės infekcijos (vidurių šiltinė, gripas, raupai, raudonukė, Botkin liga, tymai);
  • veikiant vaistams (sulfonamidams, analgetikams, prieštraukuliniams vaistams, antitiroidiniams, citostatiniams ir kitiems vaistams);
  • raumenų darbo metu, užsienio baltymų įvedimas, nervų ir temperatūros poveikis, badas, hipotoninės būsenos;
  • Ilgalaikio kraujo laikymo kambario temperatūroje (daugiau nei 4 valandos) gali būti siejama su klaidinga leukocitopenija.

Organinė leukopenija, atsiradusi dėl kaulų čiulpų aplazijos ir jos pakeitimo riebaliniu audiniu, atsiranda, kai:

  • aplastinė anemija;
  • agranulocitozė;
  • leukopeninė leukemija;
  • kai kurios Hodžkino ligos formos;
  • jonizuojančiosios spinduliuotės;
  • hipersplenizmas (pirminis ir antrinis);
  • kolageno ligos.

Leukocitozė

Leukocitozė yra kraujodaros sistemos reakcija į poveikį
egzogeniniai ir endogeniniai veiksniai. Yra fiziologinė ir patologinė leukocitozė.

Fiziologinė leukocitozė yra:

  • virškinimas - po valgymo, ypač daug baltymų; leukocitų skaičius neviršija 10,0–12,0 × 10 9 / l, o po 3-4 valandų normalus;
  • emocinis stresas (adrenalinas), stiprus fizinis krūvis, aušinimas, pernelyg didelis saulės poveikis (saulės nudegimas), daugelio hormonų (katecholaminų, gliukokortikosteroidų ir tt) skyrimas antroje nėštumo pusėje, menstruacijų metu ir dėl nevienodo leukocitų pasiskirstymo kraujyje pagrindinę.

Patologinė leukocitozė yra suskirstyta į absoliučią ir santykinę.

Absoliutus leukocitozė - leukocitų kiekio kraujyje padidėjimas iki kelių šimtų tūkstančių (100,0–600,0 × 10 9 / l ir daugiau).

  • Dažniausiai pasireiškė leukemija: lėtine leukemija - 98–100% atvejų ūminėje leukemijoje - 50-60%. Leukocitų ląstelių santykio kaulų čiulpuose ir kraujo punktais santykis yra pagrindas leukemijos diagnozei.

Nustatyta santykinė leukocitozė:

  • ūminiai uždegiminiai ir infekciniai procesai, išskyrus vidurių šiltinės, gripo, raupų, raudonukės, Botkin ligos, tymų. Didžiausia leukocitozė (iki 70,0–80,0 × 10 9 / l) stebima sepse;
  • esant toksiškoms medžiagoms (vabzdžių nuodams, endotoksinams), jonizuojančiai spinduliuotei (iš karto po švitinimo);
  • dėl kortikosteroidų, adrenalino, histamino, acetilcholino ir skaitmeninių preparatų poveikio;
  • su audinių dezintegravimu (nekroze), miokardo infarktu, periferinių arterijų tromboze su gangrena, nudegimais, eksudaciniu pleuritu, perikarditu, uremija, kepenų koma;
  • reikšmingas kraujo netekimas sužalojimuose, vidinis, ginekologinis ir kitas kraujavimas.

Leukocitų skaičiaus padidėjimas infekcinėse ligose daugeliu atvejų lydi leukocitų formulės perėjimą į kairę

Leukocitų ir trombocitų skaičiaus skaičiavimas

Veiksniai, turintys įtakos baltųjų kraujo kūnelių tyrimo teisingumui

- ilgas kraujo saugojimas kambario temperatūroje

Leukocitų kiekio kraujyje normos

Amžius Leukocitų skaičius

- 1 diena 11.6 - 22.0

- 1 savaitė 8.1. - 14.3

- 1 mėnuo 7.6 - 12.4

- Suaugusieji 4,0 - 9,0

Leukocitų kiekio kraujyje nustatymo metodai.

- Leukocitų skaičiavimas skaičiavimo kameroje

- Leukocitų skaičiavimas hematologiniuose analizatoriuose

Leukocitų skaičiaus nustatymas skaičiavimo kameroje.

- Leukocitų skaičiavimas mikroskopu atliekamas lizuojant raudonuosius kraujo kūnelius 100 didelių skaičiavimo tinklelio kvadratų ir perskaičiuojant 1 litrui kraujo, remiantis kvadratų tūriu ir kraujo praskiedimu. Leukocitų skaičius turi būti atliekamas per 2-4 valandas po kraujo surinkimo.

- Jei periferiniame kraujyje yra branduolinių raudonųjų ląstelių, jie nėra lizuojami ir skaičiuojami kartu su leukocitais. Šiuo atveju, norint nustatyti tikrąjį leukocitų skaičių, raudonoje eilutėje esančių ląstelių skaičius atimamas iš bendro skaičiuotų ląstelių skaičiaus.

- Pavyzdžiui: bendras leukocitų skaičius skaičiuojant kameroje (arba analizatoriuje) -45x109 / l. Apskaičiuojant leukocitų formulę nustatyta, kad 100 leukocitų yra 50 eritroblastų (normoblastų).

Apskaičiuojame tikrąjį leukocitų kiekį kraujyje:

150 ląstelių - 45 x 109 / l

100 ląstelių (leukocitų) - X

X = 100 * 45 * 10 / l / 150 = 30 * 10 / l

Taigi tikrasis leukocitų skaičius kraujyje yra 30 x 109 / l.

Pagrindiniai klaidų šaltiniai skaičiuojant leukocitus kameroje:

- Netinkamas kraujo ir acto rūgšties kiekio santykis, paimtas mėgintuvėlyje.

- Netinkamai paruoštas acto rūgšties tirpalas (esant daugiau kaip 5% koncentracijos, kai kurie leukocitai gali susilpnėti, todėl rezultatas bus nepakankamai įvertintas).

- Ilgalaikis mėginio veikimas esant aukštesnei nei 28 ° C temperatūrai, kuri gali pagreitinti leukocitų lizę mėginyje ir sukelti nepakankamą rezultatą.

- Netinkamas Goryaev kameros užpildymas. Kaip ir apskaičiuojant raudonuosius kraujo kūnelius, fotoaparatas turi būti paliktas 1 minutę, kad būtų galima nusistatyti ląsteles.

- Po ankstesnio apibrėžimo „Goryaev“ kamera nebuvo pakankamai gerai išplauta. Kameroje likusieji leukocitai gali pervertinti analizės rezultatus.

Trombocitų skaičiavimo metodai

- skaičiavimo kameroje

Kiekviena metodų grupė turi privalumų ir trūkumų.

- Trombocitų skaičiavimas kameroje yra pakankamai tikslus, nereikia apskaičiuoti raudonųjų kraujo kūnelių skaičiaus. Kita vertus, šis metodas yra sunkesnis, nes natūralios formos trombocitai vaizduojami mažais ir blogai kontrastingais elementais. Šio metodo trūkumas yra trombocitų skaičiavimas artimiausiomis valandomis po kraujo.

- Trombocitų kiekio kraujyje nustatymas yra žymiai prastesnis, palyginti su kameros metodu ar automatiniais skaitikliais. Kraujo tepimo skaičiavimo klaidos gali būti dėl prastos tepalo kokybės ir su tuo susijusio netolygaus trombocitų pasiskirstymo, netinkamo raudonųjų kraujo kūnelių skaičiaus nustatymo. Svarbus šio metodo trūkumas yra būtinybė tuo pačiu metu skaičiuoti trombocitus ir kraujo ląsteles. Jo privalumas yra gebėjimas bet kuriuo metu tirti trombocitus, neatsižvelgiant į kraujo surinkimo laiką.

- Trombocitų nustatymo metodas, naudojant hematologinį analizatorių, leidžia tiksliai nustatyti trombocitų skaičių, jų vidutinį tūrį ir pasiskirstymą pagal tūrį.

Leukocitų skaičius

Leukocitų skaičius apskaičiuojamas naudojant automatinį skaitiklį arba Goryaev kamerą. Norint skaičiuoti leukocitus kameroje, paruošiamas Turkio skystis - acto rūgšties tirpalas, dažomas vandeniniu metileno mėlynuoju tirpalu (0,1 ml 0,1% metileno mėlynojo tirpalo pridedama prie 9 ml 10% acto rūgšties). Bandymo mėgintuvėlyje supilkite 0,4 ml skysčio Türk. Įsigykite tiksliai 0,02 ml kraujo, atsargiai pridėkite prie praskiedimo skysčio. Kraujo skiedimas yra 1:20. Gerai išmaišykite ir palikite 4 minutes. Užpildykite kamerą Goryaeva, kruopščiai purtant mėgintuvėlį su atskiestu krauju. Fotoaparatas 1 min. Paliekamas ant lygaus paviršiaus leukocitų nusėdimui. Tada leukocitai skaičiuojami esant mažam mikroskopo padidinimui (objektyvas 8, okuliaras 10 arba 15) su tamsiu matymo lauku (kondensatorius nuleistas arba susiaurėjusi diafragma). Laikoma, kad leukocitai yra 100 neatskleistų didelių kvadratų, kurie atitinka 1600 mažų. Ląstelių skaičiavimo dideliuose kvadratuose rezultatai apibendrinti ir apskaičiuoti jų skaičių 1 μl kraujo, naudojant formulę:


kur X yra leukocitų skaičius 1 μl kraujo; A - ląstelių skaičius, skaičiuojamas 100 didelių kvadratų, 1600 - mažų kvadratų skaičius; 20 - kraujo skiedimas; 4000 yra daugiklis, dėl kurio gaunamas 1 μl kraujo tūris, remiantis mažo kvadrato (1/4000 μl) tūriu.

Leukocitų formulės skaičiavimas Ištirtos dažytos periferinio kraujo tepinėliai. Būtina sąlyga, kad būtų tinkamai atsižvelgta į kraujo ląstelių morfologines savybes, yra tinkamai pagamintas ir gerai nudažytas kraujo tepinėlis. Kraujo tepinėlis paruošiamas ant sausų, švarių, gerai nuriebalintų skaidres, brandinamas Nikiforovo mišinyje (96 ° C etilo alkoholis ir 1: 1 dietilo eteris). Laikydami stiklinę stiklą ilgiems kraštams, palieskite jo paviršių į kraujo lašą (bet ne odą), išleistą iš punkcijos, arba užpilkite kraujo lašą su mikropipete arba kapiliaru. Stiklo stiklelis laikomas ant stalo arba kairėje rankoje, kad būtų siauras kraštas. Naudodami dešinę ranką, įdėkite stiklą siaurais kraštais į stiklą su krauju į kairę nuo lašo 45 ° kampu ir stumkite jį į dešinę, kol jis paliečia kraują. Jie laukia, kol kraujas plinta per visą grunto stiklo kraštą, ir tada, greitai, greitai judant, nuveskite jį iš dešinės į kairę, kol visas lašas bus išnaudotas. Kraujo lašas turi būti mažas ir proporcingas taip, kad visas tepalas būtų dedamas ant stiklo, nepasiekiant 1-1,5 cm prieš jo kraštą. Gerai pagamintas tepalas yra plonas, gelsvas ir baigiasi „šluota“. Oro išdžiovinti kraujo tepinėliai dedami į specialius indus fiksavimui arba įprastus stiklinius stiklus, pripildytus fiksavimo skysčiu (metilo alkoholiu, fiksavimo laikas 3-5 minutės, etilo alkoholis, 30 minučių; Nikiforovo mišinys, 20-30 minučių). Fiksuoti preparatai išdžiovinami ore, o tada dažomi Romanovsky-Giemsa dažais. Baigtas dažų tirpalas Romanovsky-Giemsa (azureozinas), praskiestas 1:10 reikiamam dažymui. Stacionarūs tepalai pilami atskiestu dažikliu, kuris pilamas į tepinėlį su galbūt aukštesniu sluoksniu. Dažymas trunka priklausomai nuo oro temperatūros patalpoje nuo 25 iki 45 minučių. Baigę dažus, nuplaukite dažus distiliuotu vandeniu ir vertikaliai įdėkite smūgius į medinį stovą džiovinimui. Kraujo tepalų mikroskopija atliekama panardinant 100 × 10 didinimo būdu. Leukocitų skaičiavimas atliekamas kartu su zigzago linija („Meander linija“), skaičiuojamos 100-200 ląstelių, atsižvelgiant į atskirų leukocitų formų skaičių: stabus ir segmentuotus neutrofilus, eozinofilus, bazofilus, monocitus, limfocitus. Apskaičiuokite kiekvieno ląstelių tipo procentinę dalį.

Apskaičiuojant absoliutų fagocitų ir limfocitų skaičių, absoliutusis fagocitų (neutrofilų ir monocitų) ir aukštesnių stuburinių limfocitų skaičius apskaičiuojamas remiantis duomenimis apie leukocitų skaičių periferiniame kraujyje ir leukocitų formulėje.

Fagocitinės funkcijos tyrimas

Fagocitinio indekso ir fagocitinio skaičiaus nustatymas

Leukocitų absorbcijai ir virškinimui įvertinti buvo sukurta daug metodų. Visi jie yra pagrįsti fagocitų gebėjimu sugerti svetimas daleles, sudarančias bandymo sistemą (specifinis mikroorganizmo tipas, zimozanas, lateksas - absorbcijos objektas). Apreiškimas atliekamas in vitro arba in vivo. Bendras nustatymo kursas yra toks: Heparinizuotas arba citruotas šviežias kraujas (arba fagocitų suspensija) sumaišomas su vienodo tūrio suspenduotos mikrobinės suspensijos (Saccharomyces cerevisiae, Staphilococcus aureus, S. albus, E.coli, A. nydrophila) arba kitu absorbcijos objektu. Mišinys švelniai sumaišomas ir įdedamas į termostatą (37-40ºС - šiltakraujams, priklausomai nuo normalaus kūno temperatūros, 26 ° C - šilumai mylinčioms žuvims ir mažesniam šaltį mylinčiam). Po 15, 30, 45, 60 ir 90 minučių tepinėliai paruošiami ant skaidrių, išdžiovinami, tvirtinami metilo alkoholiu arba Nikiforovo mišiniu ir dažomi pagal Romanovsky-Giemsa. Jie žiūri į panardinimą ir nustato fagocitinį aktyvumą - fagocitų, dalyvaujančių fagocitozėje, procentą, fagocitinį indeksą - vieno fagocitinio leukocito užfiksuotų bandymų mikrobų skaičių, fagocitinį skaičių - vidutinį fagocitinių objektų skaičių per 1 aktyvų neutrofilą. Rodiklių vertinimas įvairiais laiko intervalais leidžia įvertinti fagocitozės dinamiką. Paprastai po 90 minučių fagocitinis indeksas turėtų būti mažesnis nei po 45 minučių ir 60 minučių, dėl mikrobų virškinimo. Pažeidus virškinimą, jis nekeičia.

Fagocitų funkcinio aktyvumo įvertinimas sumažinant nitro-mėlynojo tetrazolo reakciją (NBT bandymas)

Šis bandymas yra baktericidinės fagocitų funkcijos rodiklis ir leidžia jums įvertinti jų gebėjimą tapti deguonimi. Įjungus šį žudymo mechanizmą, aktyvuojamas fermentas NADPH oksidazė, dėl kurios fagocituose atsiranda reaktyviųjų deguonies rūšių. Tokių medžiagų išsiskyrimas ląstelėje vadinamas deguonies (kvėpavimo) sprogimu, kurį galima užregistruoti naudojant NBT testą. Atliekant šį bandymą, į fagocitus įterpiama nitrozino tetrazolio medžiaga, ji absorbuojama ląstelėje ir, esant reaktyviosios deguonies rūšims, tampa tamsiai mėlynos spalvos medžiaga, diformazanas. Daugiau tamsiai mėlynos granulės yra pritvirtintos prie paviršiaus arba fagocitų viduje, tuo labiau susidaro aktyvesnės deguonies formos, tuo daugiau deguonies priklauso.

NBT testas yra sudarytas iš dviejų variantų: spontaniškas ir sukeltas. Nustatant spontanišką NBT testą, fagocitai yra kultivuojami dalyvaujant NST be išankstinio ląstelių aktyvavimo, atliekant indukuotą NBT testą, į auginimo terpę pridedamas fagocitinės reakcijos aktyvatorius. NBT testo nustatymas dviejuose variantuose leidžia apskaičiuoti ląstelių funkcinį rezervą, kuris yra skirtumas tarp indukuotų diformazano teigiamų ląstelių skaičiaus (intensyvumo) ir spontaninių diformazano teigiamų ląstelių skaičiaus (intensyvumo). Indukuoto NBT testo reikšmės apibūdina fagocitinių ląstelių aktyvumą esant antigeniniam stimului ir yra laikomos jų pasirengimo pilnam fagocitozei kriterijumi. Spontaniškas NBT testas leidžia įvertinti deguonies priklausomų neaktyvių fagocitų žudymo mechanizmų aktyvumo laipsnį. Jis apibūdina intracelulinių mikrobicidinių sistemų aktyvinimo laipsnį.

Spontaniniam NBT testui sudaryti į 0,1 ml kraujo pridedama 0,05 ml 0,2% NBT tirpalo kalio fosfato buferyje (0,1, pH 7,3) ir 0,05 ml to paties buferio. Lygiagrečiai imamas mėginys, kuris atspindi indukuotą NBT testą, kuriame vietoj 0,05 ml buferio pridedamas toks pat fagocitinio aktyvatoriaus tūris (pavyzdžiui, pirogeninė koncentracija yra 50 μg / ml). Reakcijos mišinys termostatuojamas vandens vonioje, esant 37 ° C (30–60 min.). Paruošiami vidutinio tankio tepalai, išdžiovinami ore ir fiksuojami etilo alkoholyje arba Nikiforovo mišinyje (20 min.), Tada nudažomi neutraliu raudonu vandeniniu tirpalu (0,1%, 1 min.)

Po reakcijos kraujo tepinėliai mikroskopuojami panardinant (100 × objektyvas, 10 × okuliaras). Tarp 100 ląstelių skaičiuojamas aktyvuotų neutrofilų (DAN,%), turinčių diformazano granulių, santykis. Atsižvelgiant į ląstelėse deponuoto difrformazano kiekį, jų aktyvumas yra vertinamas atsitiktiniais vienetais ir apskaičiuojamas neutrofilų aktyvinimo indeksas (IAN, panaudoti vienetai):

kur yra HNe. - ląstelių, kuriose nėra diformazano granulių, skaičius;

H1 - ląstelių, kuriose diformazano nuosėdų plotas yra mažesnis nei 1/3 branduolio ploto, skaičius;

H2 - ląstelių, kuriose diformazano nuosėdos sudaro nuo 1/3 iki viso branduolio dydžio, skaičius;

H3 - ląstelių, kuriose diformazano nuosėdos užima didesnį plotą, skaičius.

Mobilizacijos koeficiento (KM) nustatymas pagal šią formulę: