C hepatito PCR kokybinė analizė

Hepatitas yra rimta liga, turinti daugybę priežasčių. Jo vystymosi pagrindas yra tiesioginė ar netiesioginė žala kepenims. Atsižvelgiant į jo svarbą visam organizmui, galima tik spėti, kaip sunku patologija. Šiame straipsnyje išsamiau išnagrinėsime hepatito C kursą ir laboratorinę diagnozę.

Ligos priežastis yra virusinis agentas, kuris reiškia RNR turinčius patogenus. Jis turi savitą bruožą - gebėjimą mutuoti, ty pakeisti jos struktūrą. Dėl šios priežasties infekcija išnyksta nuo imuninės sistemos atakos ir daugeliu atvejų sukelia lėtinį kepenų uždegimą.

Atsižvelgiant į skirtingus viruso potipius, vaistų atranka turėtų būti grindžiama genotipų nustatymo rezultatais. Nepaisant ilgo ligos tyrimo ir HCV struktūros požymių, dar nebuvo įmanoma sukurti konkrečios ligos vakcinos.

Ankstyvos diagnozės sunkumai kyla dėl asimptominio hepatito eigos, dėl kurio žmogus cirozės stadijoje lanko gydytoją. Siekiant laiku nustatyti ligą, reikia reguliariai atlikti medicinines apžiūras. Tik atlikus laboratorinius kraujo tyrimus galima aptikti HCV ir užkirsti kelią aplinkinių žmonių infekcijai. Faktas yra tai, kad infekcijos nešėjas gali ilgai ne atspėti apie patologiją ir toliau perduoti virusą sveikiems žmonėms.

Perdavimo būdai

Daugeliu atvejų virusas plinta per kraują, nes jame yra didžiausia patogeninių medžiagų koncentracija. Taigi infekcija perduodama:

• hemodializė;
• su užkrėsta adata;
• kovojant, kai sužeidžiama oda, ir atsiranda kraujo sąlytis;
• kraujo perpylimas (kraujo perpylimas).

Infekcijos tikimybė intymumo metu yra nereikšminga, nes sperma ir makšties išsiskyrimas yra nedidelis patogenų kiekis. Infekcijos rizika gerokai padidėja, pažeidžiant genitalijų gleivinės vientisumą. Tai pastebima agresyvaus ir analinio sekso metu.

Kalbant apie vertikalų perdavimo būdą, jis atliekamas darbo procese. Vaisiaus nėštumo laikotarpiu patogenas negali prasiskverbti pro placentą į embrioną. Natūralaus gimdymo metu patogeninis agentas perduodamas vaikui traumuojant odą, kai yra sąlytis su motinos krauju.

Po patogeno įsiskverbimo į sveiką organizmą prasideda antikūnų sintezė, kuri yra apsauga nuo infekcijos ir priklauso imuninei struktūrai. Jie randami pradiniame asmens tyrime, naudojant ELISA.

Norėdami patvirtinti diagnozę, pacientui taikoma polimerazės grandinės reakcija. Tai patogeninio agento genetinės medžiagos analizė ir virusinės apkrovos nustatymas.

C hepatito laboratorinė diagnostika

Laboratorinė diagnostika prasideda imunologiniu tyrimu. Jo pagrindinė užduotis yra aptikti antikūnus, pagamintus prieš patogeną. Jo efektyvumas yra beveik 95%. Šio tyrimo dėka galima nustatyti viruso nešiklį ikiklinikinėje stadijoje ir išsiųsti jį tolesniam tyrimui.

Kokybinė ELISA analizė rodo, kad paciento kraujyje yra imunoglobulinų. Jo rezultatas gali būti „teigiamas“ arba „neigiamas“. Gavęs pirmąjį atsakymą, asmuo siunčiamas kitam egzaminui - PCR. Jo kaina priklauso nuo reagentų ir laboratorijos kokybės. Polimerazės grandininės reakcijos kaina gali siekti 4 tūkst. Rublių.

PCR savybės

Naudojant polimerazės grandininę reakciją, net ir nedidelis kiekis biologinės medžiagos leidžia įvertinti viruso kiekį kraujyje, ty apskaičiuoti patogenų koncentraciją viename mililitre skysčio.

Pradėjus PCR, hepatito diagnozė tapo daug lengvesnė. Analizė leidžia nustatyti HCV RNR, nustatyti infekcinio proceso stadiją ir viruso nešiklio infekcinį laipsnį.

Yra keletas genetinės diagnostikos tipų:

1. Kokybinė C hepatito PGR analizė - patvirtina HCV buvimą arba nebuvimą tiriamojo kraujyje:
2. kiekybinis, per kurį galite apskaičiuoti virusų koncentraciją ir nustatyti ligos stadiją. Rezultatas pateikiamas TV / ml arba kopijomis / ml (priklausomai nuo laboratorijos);
3. genotipų nustatymas - būtinas HCV genotipui nustatyti. Tai reikalinga tiksliems narkotikų pasirinkimui, kurie bus veiksmingiausi šiuo atveju. Analizė netiesiogiai rodo kepenų patologinio proceso sunkumą. Taigi trečiuoju patogeno genotipu dažniausiai pastebima steatoze, kurios pagrindas yra riebalų kaupimasis hepatocituose (jų ląstelėse). Be to, viruso tipas turi įtakos gydymo kurso rezultatams ir trukmei.

C hepatito PCR kokybinė analizė

Pirmiausia laboratorijoje tiriama biologinė medžiaga, kurioje yra HCV RNR. Svarbu prisiminti, kad kokybinė hepatito C analizė turi tam tikrą jautrumo lygį, todėl ne visada gali duoti teisingą atsakymą. Tokiu atveju rekomenduojama pakartotinai atlikti laboratorinę diagnostiką naudojant kitus reagentus.

Siekiant gauti patikimus rezultatus, turėtų būti naudojamos mažiausiai 50 TV / ml jautrumo bandymo sistemos.

Diagnostinis rezultatas gali būti „teigiamas“ arba „neigiamas“. Jei patogenas kraujyje nerastas, tyrimas baigtas. Jei mėginyje aptinkamas patogeninis agentas, tada kiekybiškai įvertinama virusinė apkrova.

Pažeidus procesą, gaunamas klaidingas neigiamas atsakas, pavyzdžiui, į terpę patenka aktyvūs komponentai, slopinantys patogeno kopijų kūrimą. Taigi neįmanoma parodyti tikro kraujo, todėl asmens infekcija nėra diagnozuota.

Gali būti gautas klaidingas teigiamas rezultatas, jei buvo užterštas vamzdis, skirtas biologinei medžiagai rinkti, taip pat aplinkos tyrimui. Be to, toks analitinis atsakas įmanomas, kai mišrios infekcijos, kai kepenis veikia keli virusai, pavyzdžiui, hepatitas C ir D.

Kokybinių tyrimų indikacijos

Gydytojas gali paskirti pacientui kokybinį hepatito C viruso RNR nustatymo tyrimą:

• gavus teigiamą arba abejotiną fermento imunologinio tyrimo atsaką;
• diagnozės patikrinimui;
• nustatyti viruso apkrovą;
• nustatant ligos stadiją;
• mišrios infekcijos diagnozė. Hepatitas C dažnai užkrečia kepenis kartu su „D“ virusu;
• terapinės taktikos nustatymas atsižvelgiant į sukėlėjo genotipą;
• įvertinant pokyčių dinamiką gydymo antivirusiniais vaistais metu.

Polimerazės grandinės reakcijos privalumai:

1. aukštas metodo jautrumas, kuris leidžia nustatyti infekcijos faktą ikiklinikinėje stadijoje;
2. patogeno, o ne jo antikūnų, genetinės medžiagos identifikavimas;
3. galimybę nustatyti patogeninio agento potipį;
4. aukštas diagnostikos greitis, nes nereikia sėti medžiagos ant maistinės terpės ir pakanka naudoti konkrečias bandymų sistemas. Asmuo gauna rezultatą po 5 valandų;
5. universalumas. Analizė leidžia nustatyti bet kokią genetinę medžiagą (RNR, DNR). Dėl to gydytojas gali patvirtinti hepatito C ir kitų rūšių ligas (B);
6. gebėjimas aptikti latentinę infekciją.

Kiekybiniai tyrimai

Tiriant kraują naudojant polimerazės grandininę reakciją, galima apskaičiuoti patogenų skaičių fiksuotame biologinės medžiagos kiekyje. Rodiklis pateikiamas TV / ml. Analizuojant galima nustatyti paciento užsikrėtimo laipsnį, nustatyti infekcinio proceso etapą, taip pat įvertinti vaistų terapijos veiksmingumą.

Remiantis PCR, specialistas nusprendžia, kurios vaistų dozės gali blokuoti patogenų dauginimąsi. Be to, nustatoma antivirusinio gydymo trukmė ir gyvenimo trukmės prognozė. Svarbu prisiminti, kad bandymų sistemos turi didelį jautrumą, todėl šis metodas leidžia patvirtinti asmens infekciją ikiklinikinėje stadijoje.

Genotipavimas

Atsižvelgiant į patogeno gebėjimą mutuoti, jo genotipas yra būtinas gydymo taktikai ir antivirusinių vaistų pasirinkimui nustatyti. Pavyzdžiui, HCV 1 gydymas trunka 48 savaites, o teigiama tendencija pastebima tik 60% atvejų. 2 ir 3 genotipai turi palankesnę prognozę. Antivirusiniai vaistai skiriami 8 mėnesiams, o jų veiksmingumas siekia 85%.

Pagal statistiką, dažniausiai HCV 1, 2 ir 3 registruojami Rusijos Federacijoje.

Atšifruojant laboratorinį bandymą, šis atsakymas gali būti nurodomas - „neužrašytas“. Tai reiškia, kad virusas cirkuliuoja paciento kraujotakos sistemoje ir negali būti atpažįstamas bandymo sistemoje. Šiuo atveju analizės rezultatai rodo, kad patogenas nėra būdingas tam tikrai geografinei vietovei.

Kaip gauti patikimus rezultatus?

Kad kokybinis PGR tyrimas nustatant C hepatito sukėlėjo RNR rodytų teisingus rezultatus, būtina laikytis laboratorinių diagnostikos reikalavimų:

1. kraujo mėginiai imami tuščiu skrandžiu, o „alkanas“ atotrūkis neturi būti trumpesnis nei 8 valandos;
2. prieš dvi dienas prieš tyrimą rekomenduojama nustoti gerti alkoholinius gėrimus ir palikti aštrus, riebius ir rūkytus patiekalus;
3. atšaukti vaistų, mažinančių kraujo krešėjimą, įvedimą, pavyzdžiui, hepariną. Jei šie vaistai yra skirti dėl sveikatos priežasčių, turite apie tai pranešti gydytojui. Be to, specialistas turėtų žinoti apie kitų vaistų, kurie gali turėti įtakos laboratorinių tyrimų rezultatams, priėmimą;
4. Biologinės medžiagos surinkimo išvakarėse fizioterapinės procedūros neturėtų būti atliekamos ir joms turėtų būti daromas didelis fizinis krūvis.

Analizės rezultatus gali įtakoti ne tik kraujo dovanojantis asmuo, bet ir kiti veiksniai:

• prastos kokybės kraujo mėginiai;
• rekomendacijų dėl biologinės medžiagos vežimo nesilaikymas;
• nepakankamas laboratorinių darbuotojų mokymas;
• mokslinių tyrimų metodo nesilaikymas;
• antikoaguliantų (heparino) įvedimas kraujo mėginių ėmimo išvakarėse. Ši vaistų grupė mažina krešėjimą, taip sulėtindama reagentų darbą.

Skirtingose ​​laboratorijose diagnostinis atsakas gali šiek tiek skirtis, tačiau šios klaidos neturi įtakos galutiniam tyrimo rezultatui.

Ypatingas dėmesys skiriamas laboratorijose naudojamų bandymų sistemų tipams. Dažnai pirmenybė teikiama didelio jautrumo reagentams. Tai svarbu pacientams, sergantiems mažai virusų, nes sunku juos aptikti.

Kaip dažnai atliekamas laboratorinis tyrimas?

Pirminė polimerazės grandininė reakcija atliekama žmonėms, kurie buvo nustatyti imunologiniu tyrimu, siekiant nustatyti antikūnus prieš hepatito patogeną. Šiuo atveju jis yra paskirtas patvirtinti asmens infekcijos faktą ir nustatyti ligos stadiją. Be to, analizė leidžia nustatyti viruso potipį, kuris yra ypač svarbus vaistų pasirinkimui.

Kitas privalomo laboratorinio tyrimo laikotarpis yra 3 mėnesiai nuo antivirusinio gydymo pradžios. Diagnostika leidžia įvertinti vaistų veiksmingumą, koreguoti dozę arba jas pakeisti.

Be pagrindinių tyrimų, PCR gali būti papildomai atliekamas praėjus 4 ir 24 savaitėms nuo gydymo pradžios. Teigiamą ligos prognozę patvirtina viruso kiekio sumažėjimas po trijų gydymo mėnesių. Pavyzdžiui, jis turėtų sumažėti nuo 1 mln. TV / ml iki kelių šimtų tūkstančių.

Jei patogeninių medžiagų koncentracija kraujyje išlieka tokio paties lygio arba šiek tiek padidėja, tai rodo, kad antivirusiniai vaistai neveiksmingi, todėl reikia juos pakeisti. Naudojant PCR gydymo pabaigoje, galima patvirtinti paciento atsigavimą.

Norint teisingai interpretuoti laboratorinės diagnostikos rezultatus, būtina konsultuotis su hepatologu arba infekcinės ligos specialistu. Atsižvelgiant į didelį klaidingų atsakymų dažnumą ELISA, analizė naudojama tik pirminiam patikrinimui. Išsamesniam paciento tyrimui, naudojant polimerazės grandinės reakciją.

C hepatito viruso PCR analizė

C hepatitas yra sunkus kepenų liga bet kuriam asmeniui. Patologiją sukelia flavivirusinė HCV, kurio struktūroje yra RNR molekulė, kurioje yra bendras viruso genetinis kodas.

Patologija gali būti įvairių formų, viskas tiesiogiai priklauso nuo bendros asmens būklės ir kiekvieno organizmo savybių.

Ši struktūra leidžia analizuoti PGR viruso, esančio hepatito C kategorijoje, buvimui organizme.

Tai leidžia jums laiku nustatyti virusą, kuris yra pavojingas žmonėms, atlikti narkotikų gydymo kursą ir atstatyti sveikatą, apsaugoti organizmą nuo kepenų sunaikinimo.

HCV virusas gali pasireikšti tiek ūminiu, tiek pavojingu pavidalu ir lėtiniu būdu. Jei asmuo vienu metu ar kitaip aptiko šį virusą, jis turi būti priskirtas PCR analizei.

Kodėl atliekama PCR analizė?

Remiantis analizės rezultatais, gydytojas galės parengti gydymo režimą

C hepatito PCR laboratorinė medicininė analizė yra biologinės medžiagos, paimtos flavavirusui nustatyti, tyrimas. Tyrimas reiškia polimerazės grandinės reakciją.

Jis rodo bendrą kiekybinę virusinės pažeidimo vertę, jos kokybines savybes, taip pat galima nustatyti viruso, kuriame yra RNR, genotipą.

Svarbu! Remiantis šia analize, gydytojas nustato metodą, terapijos tipą ir trukmę. Be to, analizuojant galima nustatyti bendrą epidemiologinį veiksnį, ty ligos perdavimo kitiems vežėjams riziką.

Šiuolaikinės medicinos analizė taip pat vadinama RNR analize. Priežastis yra ta, kad hepatito C flavaviruso sudėtyje yra RNR dalelių, kurių dydis yra maždaug 30-60 nm. Vienas iš būdingų šio viruso bruožų yra tam tikra polinkis į mutaciją.

Kiekvienas porūšis arba esantis genotipas turi daugybę atsparumo. Ši aplinkybė tampa pagrindu įvairiems ligos tyrimo ir gydymo metodams, taip pat tolesnė prognozė su gerai atlikta terapija.

Kaip tai padaryti

Analizė atliekama griežtai esant tuščiam skrandžiui, ty prieš pusryčius duodamas veninis kraujas. Bandymo metodas atliekamas naudojant „Real-Time PCR“ arba labai jautriai reaguojant į modernią standartų diagnostiką, kuri atliekama realiu laiku.

Šiuo atveju apatinė aptikimo riba yra 15 TV / ml. Analizė atliekama griežtai naudojant uždaras automatizuotas sistemas. C hepatitą galima nustatyti naudojant tokius bandymus kaip COBAS AMPLICOR, kurio bendras jautrumo lygis yra 50-100 TV / ml.

Svarbu! Visi panašūs modernūs laboratoriniai tyrimai atliekami atsižvelgiant į tam tikrą jautrumo slenkstį.

Mes kalbame apie reagento gebėjimą nustatyti minimalų reagento gebėjimą nustatyti virusą tiriamoje biologinėje medžiagoje. Jei organizme nėra ligos, tyrimo rezultatas atrodys „nerastas“.

Paveikslėlyje parodyta PCR analizės grandinė:

PGR analizės tipai ir rezultatai

Jei turite mažiausių negalavimų ir skausmo slapukų srityje, nedelsdami kreipkitės į gydytoją, kuris atliks išsamų tyrimą. C hepatito PCR analizė pagrįsta trimis pagrindiniais punktais:

1. Kiekybinė analizė.
2. Kokybinė analizė.
3. Genotipavimas

Atlikti bandymai suteikia galimybę nustatyti ir nustatyti tikslią viremijos pobūdį ir skirtingus genetinio plano simptomus, susijusius su patogeno buvimu. Tiesiogiai proporcingai jautrumui, iš atliktos diagnostikos sistemos galima atlikti vieną kartą medicininius tyrimus ir patvirtinti.

Tai turėtų būti daroma siekiant išsiaiškinti anksčiau gautus rezultatus ir šiuo atveju jį naudoti jautresniu reagentu.

Aukštos kokybės PGR

Kokybinė PCR analizė yra kitas tyrimas, pavyzdžiui, polimerazės grandinės reakcija. Su standartiniu bandymo jautrumu, kuris leidžia nustatyti virusinės mikrobos buvimą, rodikliai bus 10-500 TV / ml.

Neigiama ligos analizė parodys, kad bendras koncentracijos lygis paciento kraujyje bus mažesnis už bendrą diagnostikos sistemos jautrumo ribą.

Jei kokybiško PGR metu gautas atsakas nebuvo aptiktas, tolesniam gydymui reikės žinoti bendrą reagento jautrumo slenkstį. Kalbant apie teigiamą atsaką, PCR analizės metu ją galima gauti jau ketvirtą dieną po infekcijos. Standartinės baltymų frakcijos iki nustatytų flavavirusų gali pasirodyti daug vėliau.

Bendra PCR analizės schema gali būti pavaizduota taip:

Kiekybinis PGR

Kiekybinis PCR yra specialus sukurto viruso kiekio rodiklis, atspindintis bendrą viruso RNR koncentracijos lygį žmogaus organizme. Šis rodiklis rodo virusų RNR fermentų kiekį, esantį kubiniame centimetre, paimto iš kraujo venos.

Šio tyrimo rezultatai medicininių tyrimų sistemoje žymimi vieno mililitro vienetais. Sertifikatuose, išduotuose rankose, šis rodiklis gali atrodyti 1,7 mln. Arba 1,700.000 TV / ml.

Šiems pacientams prieš pradedant gydymą antivirusiniais vaistais atliekama kiekybinė PCR analizė. Antrą kartą vyksta 12-ąją gydymo savaitę, kuri leidžia tinkamai įvertinti C hepatito gydymo rezultatus. Kitaip tariant, analizė leidžia nustatyti tokius svarbius parametrus kaip:

1. Nustatomas užkrečiamumo lygis, t. Y. Mikrobų perdavimo iš infekuoto asmens sveikam žmogui rizika. Kuo didesnė flavaviruso RNR koncentracija, tuo didesnė tikimybė, kad bus užsikrėtęs kitas asmuo, kuris yra svarbus seksualiniams santykiams.
2. Bendras veiksmingumo lygis ir pasirinktas gydymo metodas.
3. Tai puiki galimybė nustatyti antivirusinio gydymo trukmę ir prognozę. Paprastai, kuo didesnė apkrova, tuo ilgiau truks gydymas.

Verta žinoti, kad kiekybinė PCR priklauso nuo konkretaus laboratorinio tyrimo tipo ir jautrumo ribos. Mažiausia nustatyta standarto riba yra rodiklis, kuris neviršija 600 000 TV / ml.

Vidutinis vidurkis yra nuo 600 000 iki 700 000 TV / ml. Jei rezultatai buvo gauti virš 800 000 TV / ml, gydytojas nedelsdamas nustato didelę medžiagos, pvz., RNR, koncentraciją su sudėtyje esančiu virusu.

Svarbu! Tiesioginis ryšys tarp HCV RNR ir ligos sunkumo rodo, kad šis virusas yra bendroje kraujo kompozicijoje, ir pažymi patologijos sudėtingumą. Pacientas gali turėti pakankamai aukštą viruso kiekį. Be to, šis ryšys rodo, kad ląstelės yra gana didelės žalos.

Genotipavimas

Dėl santykinai didelio HCV mutacijos aktyvumo gamtoje, atliekant bandymus, galima nustatyti, kaip viruso tipas yra sergančio asmens kraujyje. Šiuolaikinėje medicinoje yra žinomi 11 viruso genotipų, pvz., Hepatito C, įskaitant gana daug skirtingų porūšių arba potipių.

1,2 ir 3 tipai yra žinomi ir paplitę Rusijoje, paprastai genotipų nustatymas yra labai svarbus atlikto tyrimo elementas. Su juo gydytojas supranta patologijos pasipriešinimo ar atsparumo pasirinktam vaistui lygį.

Beveik visada, remiantis šia analize, bus kuriamas būsimas gydymas. Tai svarbu, nes yra tokių gydymo taisyklių, kaip:

C hepatito kokybinė analizė

2017 m. Kovo 8 d., 12:29 Ekspertų straipsniai: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10 547

Kokybinė polimerazės grandinės reakcijos - hepatito C PGR analizė lemia HCV buvimą arba nebuvimą organizme. Laboratorinėmis sąlygomis tiriama RNR struktūra, kuri apims virusą. Jei aptinkamas virusas C, būtina atlikti gydymo kursą, nes apleista kepenų būklė sukels rimtų pasekmių. Aukštos kokybės PCR atliekamas po regeneravimo, kad būtų patvirtintas antikūnų nebuvimas. Paskirti ir atlikti įprastiniai patikrinimai. Su maža sukėlėjo koncentracija kraujyje, PCR (kokybinė) gali nieko nerasti, nes diagnostikos sistema turi savo jautrumo ribas. Pradinės ligos stadijos arba lengvos formos atveju, ultravioletinė diagnostika atlieka PCR itin jautrioje įrangoje.

Kas yra RNR virusas?

C hepatito viruso (arba hepatito C viruso RNR) terminas yra pati kepenų liga. Virusas C prisijungia prie sveikos kūno ląstelės įsiskverbdamas viduje. Laikui bėgant, išplitęs visas kūnas, būtina tik patekti į kraują. Dėl to patogenas prasiskverbia į kepenis, saugo savo ląsteles ir veikia sunkiai. Kepenų ląstelės (hepatocitai) veikia jos įtakoje, vyksta pokyčiai, ir nuo to jie miršta. Kuo ilgiau virusas yra kepenyse, tuo didesnis ląstelių skaičius. Laikui bėgant išsivysto pavojingos ligos, sukeliančios piktybinį degeneraciją ir mirtį.

Kepenų infekcija su šio tipo virusais gali pasireikšti išoriškai. Daugelį metų ar dešimtmečių užsikrėtęs žmogus jaučiasi visiškai sveikas, ir tik atsitiktinis tyrimas dažniausiai atskleidžia patologiją. Duodant kraują hepatitui, tiriama dalis RNR (ribonukleino rūgšties) grandinės, kuri yra žmogaus geno (DNR) dalis. Laboratorinių tyrimų rezultatai neturėtų būti naudojami savarankiškam apdorojimui, nes tai tik rodiklis. Tikslesnį vaizdą ir tolesnę diagnozę geriau nustato gydytojas.

Kai baigsite: tyrimų nuorodos

Patvirtinus HCV, atliekama PCR analizė (polimerazės grandininė reakcija). PCR tyrimai padeda rasti priežastinį vaistą RNR struktūroje ir paskirti veiksmingą gydymą. Paskirtas šiais atvejais:

• kepenų uždegimo požymių nustatymas;
• atrankos tyrimai prevencijai;
• kontaktų asmenų tyrimas;
• mišrios kilmės hepatito diagnostika (pagrindinio patogeno nustatymas);
• nustatyti viruso reprodukcijos aktyvumo lygį lėtine forma;
• kepenų cirozė;
• nustatyti nustatyto gydymo veiksmingumą.

Tyrimo PCR nurodo gydytojui nustatyti hepatito gydymo efektyvumą.

Yra kokybinė ir kiekybinė PGR analizė. Kiekybinis PCR rodo RNR procentą su viruso nešikliais kraujyje, o kokybinis rodo viruso buvimą arba nebuvimą. Teigiamam kokybės rodikliui (C hepatito RNR buvimui) taip pat reikia atlikti kiekybinius tyrimus. Didelė hepatito C sukėlėjo koncentracija yra susijusi su jos perdavimo rizika, ty kitų infekcija. Mažas skaičius yra geriau gydomas. RNR virusų kiekis kraujyje nėra susijęs su ligos intensyvumu. PCR analizė taip pat atliekama gydant interferoną, siekiant nustatyti gydymo kurso trukmę ir sudėtingumą.

Aukštos kokybės hepatito C PCR analizės savybės

Visiems pacientams, sergantiems hepatito C antikūnais savo kraujyje, skiriama kokybinė analizė su polimerazės grandinės reakcijos rodikliu. Rekomenduojama atlikti hepatito B tyrimą, tada, jei yra teigiamas rezultatas, ir D hepatito atveju. Kokybiškai ištirtą reakciją reikia atlikti kartu su kitais kraujo tyrimais. Analizės parodys pilną virusų plitimo vaizdą.

Remiantis bandymų rezultatais, tik teigiamas hepatito C testas bus matomas arba neigiamas, ty viruso buvimas ar nebuvimas. Jei išėjimas yra „aptiktas“, virusas yra ir yra aktyvus. Pavadinimas „nenustatytas“ reiškia viruso nebuvimą arba jo nedidelį kiekį. Turint omenyje šį rodiklį, reikia nepamiršti, kad diagnostinių sistemų analitinis jautrumas yra skirtingas ir kad RNR hepatitas C vis dar gali būti kraujyje, tačiau jo neatsiranda analizėje.

Ypač jautrus PCR metodas atskleidžia itin hepatitą C net ir nedideliais kiekiais. Naudojamas fluorescencijos hibridizacijos tyrimas, kuris yra daug kartų didesnis nei standartinių PGR sistemų. Metodas naudojamas keliais atvejais:

• įtariamos paslėptos hepatito C formos;
• PCR diagnostika nepatvirtino patogeno, tačiau yra antikūnų;
• išieškojimo atveju;
• nustatyti ankstyvą infekciją.

Grįžti į turinį

Dekodavimo analizė

HCV PCR dekodavimas daro įtaką galutiniam sprendimui diagnozuojant, ypač ultrametodo metodu. Pagrindinis šio tyrimo trūkumas yra griežtas mėginio ir medžiagų sterilių sąlygų laikymasis. Nedidelis nukrypimas kartais rodo netikslias analitines išvadas, apsunkina diagnozę ir vėlesnį gydymą. PCR analizė hepatito RNR nustatymui ne visada užtikrintai rodo ligos vaizdą, kartais leidžiama netikslumų ir abiem kryptimis.

Diagnozuojant hepatito virusą, rekomenduojama atlikti išsamų tyrimą.

Rodiklių norma

Analizuojant polimerazės grandininę reakciją, laikoma, kad tyrimo rezultatuose nėra JgM antikūnų virusiniam hepatitui C. Tuo pačiu metu serologinės analizės rezultatai rodo, kad yra antikūnų prieš virusą C, ir tai taip pat yra normali. Kokybinis apibrėžimas neparodo ligos intensyvumo, jis atskleidžia tik C hepatito priežastį RNR. Ši analizė kartojama po gydymo, kad būtų patvirtintas faktinis regeneravimas.

Nukrypimai

Jei yra JGM antikūnų prieš HCV RNR, tai rodo besivystančią infekciją. Liga tuo pačiu metu vyksta akutingai arba chroniškai, pasireiškianti įvairiais etapais. Jei užfiksuotas antikūnų skaičiaus sumažėjimas, analizė parodys, kad gydymo rezultatai buvo pasiekti atsigavimo metu. Labai retai pasitaiko klaidingų teigiamų diagnostikos duomenų. Jie randami moterims nėštumo metu ir žmonėms, sergantiems kitomis infekcinėmis ligomis.

Hepatito C PGR analizė

"Lėtinio virusinio hepatito C (CVHS)" diagnozavimui reikalingas išsamus asmens tyrimas, apimantis klinikinius, laboratorinius ir instrumentinius tyrimus. Svarbi diagnozės požiūriu teisinga diagnozė yra PCR metodas - polimerazės grandinės reakcija.

Ką rodo ši analizė ir kodėl tai reikalinga?

Šis laboratorinis metodas aptinka hepatito C viruso RNR žmogaus kraujyje. Kartu su imunosorbento tyrimu (ELISA), skirtu antikūnams prieš virusą, PCR naudojamas CVHC ir jo patogeno genotipo diagnozei atlikti. Šis tyrimas yra vienas iš naujausių laboratorinių diagnostikos metodų. Jo patikimumas CVHS viršija 97%, o tai yra labai geras tyrimų rodiklis.

Yra trys PGR kraujo tyrimai, skirti CVHS: kokybinis, kiekybinis ir virusinis genotipas. Pirmasis viruso tyrimas (kokybinė analizė) jį nustato kraujyje, todėl jis naudojamas tik diagnozei.

Antrasis (kiekybinis) tyrimas lemia viruso apkrovos laipsnį organizme, todėl jis naudojamas gydymo veiksmingumui stebėti.

Trečiasis PCR (genotipas) paaiškina diagnozę, nustatantį viruso genotipą, kuris yra labai svarbus skiriant tinkamą antivirusinį gydymą.

Polimerazės grandininės reakcijos metodo esmė yra fermentų, kurie daugina genetinės medžiagos patogeną biomedžiagoje, naudojimas. Tokio replikacijos metu mėgintuvėlis su krauju keletą kartų šildomas ir atšaldomas iki temperatūros, reikalingos pagreitinti fermentinę reakciją. Dėl šių manipuliacijų viruso genomo kiekis daug kartų padidėja, todėl jis gali būti aptinkamas net minimaliu kiekiu.

PCR diagnostika turi daug privalumų, palyginti su kitais laboratoriniais tyrimais:

• didelis jautrumas - 97-98%;
• garantuotas analitinis specifiškumas (tiksliai atskleidžia patogeną, kurį norite rasti, o ne su juo susijusį kamieną);
• atlikimo greitis (išvados priėmimas trunka ne ilgiau kaip 2 dienas).

Trijų tipų PCR tyrimai

Visiems pacientams, kuriems ELISA analizė nustatė HVGS viruso antikūnus, skiriama aukštos kokybės PCR analizė. Atlikus aukštos kokybės PCR, galima gauti dvi atsakymo parinktis: "RNR aptikta" arba "RNR nėra aptikta". Norint nustatyti minimalų viruso kiekį kraujyje, reikalingos bent 50 TV / ml jautrumo bandymo sistemos. Jei viruso koncentracija paciento kraujyje yra mažesnė nei diagnozė, tyrimo rezultatas gali būti klaidingas. Siekiant išvengti tokios diagnostikos klaidos, laboratorijos, atliekančios PGR diagnostiką, turėtų būti aprūpintos labai jautriomis bandymų sistemomis. Pavyzdžiui, laboratorijoje „Invitro“ naudojami 15 TV / ml jautrumo bandymai. Laboratoriniai darbuotojai privalo pateikti informaciją apie testų jautrumą pacientams ir gydytojams po pirmojo prašymo.

PCR kiekybinė analizė lemia viremijos laipsnį, ty patogeno koncentraciją kraujyje, viruso kiekį. Šio tyrimo rezultatas, priešingai nei aukštos kokybės PGR, išreiškiamas skaičiais, pavyzdžiui, 2 × 10 * 6 TV / ml, o tai reiškia, kad 2 milijonai tarptautinių vienetų yra 1 ml kraujo. Kai kurios laboratorijos naudoja kitą rodiklį - kopijų skaičių / ml. Šie du rodikliai yra lengvai konvertuojami: 1 tarptautinis vienetas lygus 4 RNR kopijoms. Taigi, 2 × 10 * 6 TV / ml reiškia, kad 8 × 10 * 6 viruso RNR kopijos 1 ml, t.y. 8 milijonai kopijų 1 ml kraujo.

Genotipavimas yra vieno iš šešių viruso genotipų apibrėžimas. Klinikinis vaizdas, kepenų komplikacijų išsivystymo greitis ir prognozė paciento būsimam gyvenimui priklauso nuo sukėlėjo genotipo. Viruso genotipas yra labai svarbus jau diagnozavimo stadijoje, nes vaistų derinys ir pacientui skirto gydymo kurso trukmė priklauso nuo jo teisingo nustatymo.

Tačiau net ir šis „tarsi tobulas“ laboratorinis tyrimas turi savo trūkumų:

• tyrimas kartoja visų patogenų, net negyvų, genetinę medžiagą, kuri gali iškreipti rezultatą. Todėl, siekiant stebėti efektyvumą naudojant PCR, pakartotinė analizė atliekama ne anksčiau kaip praėjus 2 mėnesiams po ankstesnio, kad negyvi virusai galėtų „palikti“ paciento organizmą;
• dalis virusinės genomo, kuris nustatomas naudojant bandymų sistemas, teoriškai gali būti kitų virusų ar mikroorganizmų, todėl yra klaidingo teigiamo atsako galimybė;
• virusai greitai mutuoja. Kartais viruso mutacijos greitis ir mastas yra toks didelis, kad bandymo sistema nustoja gaudyti genomą. Todėl galimas klaidingas neigiamas rezultatas.

Siekiant ištaisyti šiuos trūkumus, laboratorinių bandymų sistemų, skirtų PCR diagnostikai, gamintojai nuolat atlieka bandymus, įskaitant kryžmines reakcijas ir jautrumą tam tikram viruso genotipui.

Kaip vartoti hepatito C PCR testą?

Kad PCR tyrimas būtų patikimas, būtina griežtai laikytis pasirengimo jo elgesiui taisyklių:

• tyrimas atliekamas tuščiu skrandžiu (gliukozė, riebalai, mineralai, patekę į kraują iš maisto, gali paveikti fermento reakcijos greitį ir kokybę);
• skirtumas tarp paskutinio valgio ir kraujo mėginių analizės turėtų būti ne trumpesnis kaip 8 valandos;
• tyrimo išvakarėse draudžiama vartoti alkoholį ir vartoti riebaus maisto, kurio pašalinimo laikotarpis yra užsitęsęs;
• dieną prieš išvykstant į laboratoriją reikėtų vengti stipraus fizinio ir emocinio streso;
• kol kraujo mėginių ėmimo laikas nėra rekomenduojamas rūkyti.

Siekiant išvengti klaidingų išvadų, tariamas pacientas turi atvykti į laboratoriją šiek tiek anksčiau nei kraujas. Tai užtrunka 15-20 minučių, kad žmogus kvėpuotų, nuramintų. Adrenalinas, kuris po greitos vaikščiojimo yra kraujo, gali turėti įtakos tyrimo rezultatams.

Jei pacientas, kuriam buvo atliktas tyrimas, vartoja vaistus, apie tai turėtų pranešti gydytojui. Gali būti, kad kai kuriuos iš jų reikės atsisakyti tam tikrą laiką (jei įmanoma).

C hepatito PCR analizės rezultatas

Analizės atlikusios laboratorijos gydytojo rezultatų dekodavimas. Dekodavimas yra iš normų gauto rezultato nuokrypio nustatymas. Rodiklių rodiklį tiesiogiai nustato bandymų sistemos gamintojas, kurį laboratorija naudoja diagnostikai. Todėl nenuostabu, kad kai kuriose laboratorijose viruso apkrova nustatoma TV / ml, o kitose - kopijomis / ml.

Priėmus išvadą, būtina ją tinkamai interpretuoti. Tyrimo rezultatus gydyti turi hepatitu C sergančio paciento gydytojas. Tik po objektyvaus, instrumentinio ir laboratorinio paciento tyrimo gydytojas gali gauti pakankamai duomenų, kad būtų galima teisingai suprasti gautus PGR rezultatus.

Kokybinės analizės vertinimas paprastai nesukelia sunkumų net pacientams. Rezultatas gali būti tik vienas: „aptiktas“ arba „nenustatytas“. Šiuo atveju antroji iš jų yra norma.

Kiekybinės analizės rodiklius sunkiau interpretuoti. Tai rodo paciento virusinės apkrovos laipsnį. Net tarp hepatologų nėra sutarimo, kaip gydyti nustatytą viremiją. Dauguma gydytojų yra linkę manyti, kad reikia atsižvelgti į didelę apkrovą, didesnę kaip 8 × 10 * 5 TV / ml. Laikoma, kad apkrova yra didesnė kaip 1 × 10 * 7 TV / ml, o maža apkrova yra mažesnė nei 4 × 10 * 5 TV / ml.

Virusinės apkrovos laipsnis rodo viruso virulentiškumą (agresyvumą): kuo didesnis jo kiekis kraujyje, tuo greičiau gali išsivystyti kepenų komplikacijos. Didelė viruso koncentracija nėščios moters kraujyje padidina tikimybę, kad ji prasiskverbia per hemato-placentinį barjerą vaisiui. Viremija taip pat turi įtakos gydymo veiksmingumui: mažai gydymo veiksmingumas yra didesnis nei didelių.

Norint būti tikriems C hepatito PCR analizės tikslumui, būtina teikti pirmenybę tik toms laboratorijoms, kurios yra gerai įrodytos. Šiuo atveju kainodaros politika neturėtų būti pagrindinis vaidmuo.

PCR diagnostikos naudojimas

Polimerazės grandininė reakcija (PCR) molekulinėje biologijoje yra eksperimentinis virusų aptikimo metodas. Tai leidžia žymiai padidinti tam tikrų nukleorūgščių fragmentų (DNR) koncentraciją biologinės medžiagos mėginiuose, kurie leidžia nustatyti (atpažinti) ir suskaičiuoti.

Analizė atliekama taip. Į mėgintuvėlį patenka genetiška medžiaga (kraujo mėginys), kuris gali apimti norimą geną. Taip pat yra pradmenų - chemiškai sintezuotų nedidelio ilgio geno segmentų.

Prie indo taip pat pridedama DNR arba RNR polimerazė, ji sugeba susikurti nukleino rūgšties grandinę, kuri yra visiškai identiška originalui. Gauta kompozicija švirkščiama ir keturių laisvų nukleotidų rinkinys - speciali RNR arba DNR statybinė medžiaga, iš kurių viena yra radioaktyviosios fosforo dalelės.

Gautas mišinys kaitinamas iki 95–96 ° C, todėl du audiniai, kurie paprastai susipynę, yra austi. Tada vaistas atšaldomas, tuo metu pradmenys patys prisijungia prie norimo viruso genomo regiono, neleidžiant RNR (arba DNR) iš naujo suformuoti dvigubą spiralę.

Aušinimo procese polimerazė ieško laisvos nukleotidų grandinės. Šio fermento veikimui reikalinga viena nukleotidų grandinė. Kadangi polimerazė paslysta išilgai DNR grandinės (kaip žiedas ant virvės), ji negali dirbti su dvigubu spirale.

Po to atliekamas pakartotinis šildymo ciklas, dėl kurio atskiriamos nukleotidų grandinės. Kiekviename iš šių PCR ciklų norimo hepatito geno kiekis mėginyje didėja eksponentiškai, o likusi genetinė medžiaga yra gaminama (auga) tiesiškai.

Išgryninus tirpalą nuo nukleotidų liekanų ir išskiriant DNR grandinių elektroforezę pagal molekulinės masės parametrą, galima lengvai nustatyti, ar tiriamame mėginyje yra norimas genas.

PCR privalumai

Laboratoriniai tyrimai, naudojant PCR, leidžia gauti daugiau informacijos nei viruso RNR buvimas. Nustatant radioaktyviosios spinduliuotės lygio parametrą, galima nustatyti, kiek genetinės medžiagos iš pradžių buvo tiriamame mėginyje. B hepatito atveju nustatyti virusinės apkrovos rodiklį.

Kitas šio metodo privalumas yra labai didelis CR reakcijos jautrumas. Tai daug didesnis nei klasikiniai virusų aptikimo metodai. Idealiu atveju, norint nustatyti norimą geną, PCR atveju tik vienas virusas yra pakankamas.

Be to, PCR yra visiškai specifinis. Jo pradmenys yra suprojektuoti taip, kad jie visiškai atitiktų unikalius norimų genų regionus, kurių nėra kitos sekos. Kaip ir pirštų atspaudai, kiekvienas genas turi unikalias nukleotidų sekas.

PGR kokybinė analizė

Kokybinė analizė atskleidžia tik viruso buvimą kraujyje. Šis tyrimas turi būti atliekamas visiems pacientams, kuriems kraujyje buvo aptikti C hepatito antikūnai, ir tai gali sukelti tik vieną iš dviejų reikšmių: „aptikta“ arba „nenustatyta“. Sveikame asmenyje norma (pamatinė vertė) turėtų būti „nenustatyta“.

Ypatingas tokių kokybinių tyrimų rezultatų aiškinimas:

• Rezultatas yra „aptiktas“. Tai reiškia, kad RNR fragmentas, būdingas hepatito C virusui, buvo nustatytas analizuojamame biologinės medžiagos mėginyje, todėl yra faktas, kad pacientas yra užsikrėtęs hepatito C virusu. ir šiuo metu organizme užkrečia naujas kepenų ląsteles.
• Rezultatas „nėra aptiktas“. Toks sprendimas rodo, kad analizuojamame gautos biologinės medžiagos mėginyje šioje laboratorijoje nerasta hepatito C virusui būdingo RNR fragmento, o patogeno infekcijos RNR koncentracija šiame mėginyje buvo mažesnė už bandymo jautrumo ribą.

Ūminėje hepatito C viruso RNR fazėje tokie kokybiniai tyrimai, atliekami pagal PCR metodą, gali būti aptikti jau po 1-2 savaičių iš karto po infekcijos, ty ilgai prieš antikūnų atsiradimą pačiam hepatitui.

Šio tyrimo nepatikimus bandymų rezultatus galima gauti:

• užteršta biomedžiaga;
• heparino buvimas paciento kraujyje;
• cheminių ar baltymų medžiagų (inhibitorių), kurie turi įtakos įvairiems PCR komponentams, mėginyje.

Norint atlikti kokybinę PGR analizę, pacientui nereikia specialaus tyrimo. Naudojama medžiaga yra veninis kraujas.

Rezultatų vertinimas

Aukštos kokybės PCR testai turi tam tikrą jautrumą, ir priklausomai nuo tyrimų tikslumo ir laboratorijos įrangos lygio gali svyruoti nuo 10 iki 500 TV / ml.

Tai reiškia, kad jei kraujo mėginyje esantis virusas yra labai mažoje koncentracijoje (mažesnis nei šios laboratorijos slenksčio jautrumo vertė), tuomet ligonio rezultatas gali būti „nerastas“. Dėl šios priežasties, atliekant kokybinę PCR analizę su mažu viremijos lygiu (maža virusų koncentracija), pavyzdžiui, pacientams, kuriems atliekamas antivirusinis gydymas, labai svarbu žinoti šios diagnostikos sistemos jautrumo slenkstį.

Diagnostikos sistemų variantai

Siekiant kontroliuoti virusologinį atsaką, rekomenduojama naudoti diagnostines sistemas, kurių jautrumo riba yra mažiausiai 50 TV / ml, kai atliekamas antivirusinis gydymas. Šie kriterijai tenkinami, pavyzdžiui, naudojant Cobas Ampicolor HCV-Test analizatorius (tikslumas iki 50 TV / ml), taip pat ir RealBest HCV RNR (jautrumas 15 TV / ml).

Remiantis PSO rekomendacijomis, siekiant nustatyti galutinę C hepatito diagnozę, būtina remtis tik remiantis trijų kartų C viruso RNR nustatymu paciento serumo mėginiuose, nesant kitų veislių hepatito žymenų.

Be PCR metodų, TMA tyrimas (transkripcijos amplifikacijos metodas) taip pat naudojamas aptikti HCV RNR pacientams. Jis turi geriausią jautrumo slenkstį (5–10 TV / ml), tačiau mūsų šalyje toks testavimo metodas dar nėra labai dažnas.

Nustatytų virusų pakeitimų diapazonas

Toks kokybinis nustatymas hepatito C viruso RNR buvimo serume leidžia nustatyti kelis šio viruso genotipus. Šiuo metu mokslas žino daugiau kaip šešis šio viruso genotipus, taip pat apie 10 šios ligos potipių.

Mūsų šalyje bendri virusai 1, 2, 3 genotipai. Laboratorijos gali nustatyti šiuos genotipus: 1a ir 1b, 2a, 2b ir 2c, taip pat 3, 4, 5a ir 6, nepriklausomai nuo potipių. Visiems virusų modifikacijoms aptikimo specifiškumas yra 100%.

PCR kiekybinė analizė

Naudojant kiekybinį PGR testą, nustatomas hepatito viruso koncentracijos kraujo mėginiuose lygis (virusinė apkrova). Šis viremijos testas (virusų koncentracija) leidžia nustatyti tam tikros genetinės medžiagos vienetų skaičių (pati virusinė RNR), kuri aptinkama tam tikru kiekiu. Šiuo atveju nustatykite jo koncentraciją 1 ml, kuris atitinka 1 cu. žr

Analizės kiekybiniai parametrai išreiškiami skaičiais, šiuo tikslu tarptautiniai vienetai (TV) mililitre (ml), vadinami IU / ml, naudojami kaip matavimo vienetai. Dabar kai kuriose laboratorijose viruso kiekis gali būti nustatomas kituose vienetuose: kopijų skaičius ml nurodomas kaip kopijos / ml.

• C hepatito atveju tokia kiekybinė PGR analizė atliekama prieš pat gydymo pradžią. Tada 1, 4, 12 ir 24 savaites. Įvertinimas 12-ąją savaitę yra orientacinis, tai leidžia nustatyti terapijos efektyvumą.
• Pasirengimas analizei. Norint atlikti kiekybinę PCR analizę, paciento specialaus pasirengimo tyrimui atlikti nereikia. Pusė valandos iki mėginių ėmimo neturėtų rūkyti. Venų kraujas naudojamas kaip laboratorinė medžiaga.

Rezultatų vertinimas

Skirtingų laboratorinių bandymų sistemų atveju šio rodiklio konversijos koeficientai yra skirtingi TV / ml. Vidutiniškai jie naudoja konversijos parametrą, kuriame 4 kopijos / ml = 1 TV / ml. Tai yra, pavyzdžiui, jei laboratorija pateikia PCR analizės rezultatus 2,4 * 106 kopijų / ml, tada šis parametras turėtų būti suskirstytas į 4 ir mes gausime 6 * 105 IU / ml.

Laikoma, kad 800 000 TV / ml yra didelė apkrova, kuri maždaug atitinka 3 000 000 kopijų / ml. Maža viremija, pasak kai kurių autorių, atitinka kiekybinio PCR parametrus, mažesnius nei 400 000 TV / ml.

Pagal kiekybinį bandymą galutiniai rezultatai gali būti pateikti ne skaitmeninės vertės forma, bet: „žemiau matavimo diapazono“ arba „nenustatyti“.

• Vertinimas: „žemiau matavimo diapazono“. Tai rodo, kad kiekybinis tyrimas nepavyko aptikti hepatito C virusinės RNR, tačiau pats virusas organizme yra labai mažose koncentracijose. Tai patvirtina papildomas kokybės tyrimas, patvirtinantis viruso buvimą.
• Įvertinimas: nenustatytas. Šis rezultatas rodo, kad kiekybinis testas RNR mėginyje nėra.

Virusinės apkrovos parametras, visų pirma, lemia ligos infekcijos laipsnį, paciento „užkrečiamumo“ lygį. Kuo didesnė paciento viruso koncentracija, tuo didesnė tikimybė, kad ji bus perduota kitiems žmonėms. Pavyzdžiui, lytinio akto metu su sergančiu asmeniu arba vertikaliai. Šis kiekybinis rodiklis taip pat padeda nustatyti paciento gydymo veiksmingumą.

Kiekybinė CCP analizė yra svarbi antivirusiniam gydymui, vertinant jo sėkmę ir planuojant kurso trukmę. Taigi, esant greitam organizmo atsakui į gydymą ir mažu viremijos laipsniu, gydymo trukmė gali būti sumažinta.

Jei kiekybinis PCR parametras yra lėtai mažinamas, antivirusinis gydymas turėtų būti išplėstas arba pakeistas. Jei viruso kiekis yra mažas, tai yra palankus gydymo faktorius, jei padidėja, tada naudojamas metodas yra neveiksmingas, o vaistai ar jų naudojimo būdai turėtų būti pakeisti.

C hepatito PCR kokybinė ir kiekybinė analizė: neigiamas, teigiamas, transkriptas

C hepatitas yra virusinė kepenų liga, kurią sukelia flavivirusinė HCV (iš anglų hepatito C viruso), kurios struktūra turi ribonukleino rūgšties molekulę (RNR). RNR turi genetinį viruso kodą. Jo buvimas leidžia analizuoti hepatito C PCR.

HCV pavojus žmogui slypi tuo, kad vadinamasis serologinis langas (laikas tarp infekcijos ir imuninės sistemos reakcijos atsiradimo) gali būti gana ilgas - nuo kelių savaičių iki šešių mėnesių.

Jis neaptinka infekcijos ir pradeda gydymą laiku.

Priklausomai nuo individualių organizmo savybių, HCV nešiklis gali pasireikšti ūminėje formoje, taip pat pasireikšti kaip lėtinė liga, kuriai reikės ilgai ir brangiai gydyti. Nustatant HCV antikūnus, atliekami keli laboratoriniai tyrimai, įskaitant C hepatito tyrimą. Šis tyrimas atliekamas visiems žmonėms, kurių kraujo antikūnai prieš HCV.

Kas yra PCR analizė?

C hepatito PCR laboratorinė analizė - biologinės medžiagos tyrimas, siekiant nustatyti flavaviruso buvimą.

Polimerazės grandininė reakcija (kaip apibūdinama santrumpoje) rodo kiekybinę kūno virusinės žalos vertę, jos kokybines savybes, taip pat viruso, turinčio RNR, genotipą.

Jų pagrindu, taip pat remiantis papildomomis analizėmis, nustatomas gydymo metodas ir trukmė, taip pat epidemiologinis veiksnys (perdavimo į kitą nešiklį rizika).

Kas yra C hepatito RNR analizė?

Hepatito C PCR taip pat vadinama RNR analize (HCV RNR), nes Flavavirusuose yra RNR dalelių, kurių viriono dydis yra 30-60 nm. Vienas iš šio mikroorganizmo bruožų yra didelė polinkis į mutacijas.

Kiekvienas viruso pogrupis (genotipas) turi skirtingą atsparumą, kuris sukelia skirtingus gydymo metodus ir tolesnio paciento prognozės pobūdį.

Biologinė medžiaga (venų kraujas) duodama tuščiu skrandžiu ir paprastai išbandoma naudojant „Real-Time PCR“ metodą (labai jautri realaus laiko diagnostika su mažesne aptikimo riba - 15 TV / ml, naudojant uždaras automatines sistemas).

Yra ir kitų bandymų, pavyzdžiui, COBAS AMPLICOR, kurio jautrumas yra 50-100 TV / ml. Bet kokiam laboratoriniam tyrimui jautrumo slenkstis yra svarbus, t.y. reagento gebėjimas nustatyti minimalią viruso koncentraciją biologinėje medžiagoje.

C hepatito analizės tipai pagal PGR

C hepatito PGR apima tris svarbius komponentus:

• kokybinė analizė;
• kiekybinė analizė;
• genotipų nustatymas.

Šie testai gali nustatyti viremijos pobūdį ir patogeno genetines savybes. Priklausomai nuo diagnostinės sistemos jautrumo, tyrimas atliekamas vieną kartą, o kartais atliekamas antrasis bandymas su jautresniu reagentu, siekiant patvirtinti arba patobulinti rezultatus.

Aukštos kokybės PCR hepatitas C

Hepatito C PCR analizė yra dar vienas bendras polimerazės grandinės reakcijos analizės pavadinimas. Bandymo standartinis jautrumas, leidžiantis aptikti virusinių pažeidimų buvimą, yra 10-500 TV / ml.

Neigiamas C hepatito PCR tyrimas rodo, kad viruso koncentracija paciento kraujyje yra mažesnė už diagnostinės sistemos jautrumo ribą.

Jei aukštos kokybės PCR davė atsakymą „nepastebėta“, tada tolesniam apdorojimui svarbu nustatyti reagento jautrumo slenkstį.

Baltymų frakcijos į flavavirusą atsiranda daug vėliau.

C hepatito kiekybinė PGR

Hepatito C PCR kiekybinis yra viruso apkrovos rodiklis, kuris atspindi flavaviruso RNR koncentracijos organizme lygį. Tai rodiklis, rodantis, kiek viruso RNR fragmentų yra viename kubiniame centimetre kraujo. Hepatito C RNR rezultatai pagal kiekybinį tyrimą įprastinėje sistemoje yra nurodyti tarptautiniuose vienetuose mililitre (TV / ml) ir gali būti registruojami skirtingais būdais, pavyzdžiui, 1,7 mln. Arba 1,700.000 TV / ml.

Prieš pradedant gydymą antivirusiniais vaistais ir gydymo 12-ąją savaitę pacientams nustatoma hepatito C kiekybinė PCR diagnostika, siekiant įvertinti pasirinkto HCV gydymo metodo rezultatus. Virusinė apkrova leidžia nustatyti tris svarbius ligos rodiklius:

• užkrečiamumas, t.y. viruso perdavimo iš vieno vežėjo į kitą rizika (kuo didesnė flavaviruso RNR koncentracija, tuo didesnė tikimybė užkrėsti kitą asmenį, pvz., lytiniu ryšiu);
• gydymo metodas ir veiksmingumas;
• antivirusinio gydymo trukmė ir prognozė (tuo didesnė viruso apkrova, tuo ilgiau trunka gydymas).

C hepatito kiekybinė PCR diagnostika priklauso nuo laboratorinio tyrimo tipo ir jautrumo ribos. Apatinė normos riba laikoma rodikliu iki 600 000 TV / ml, vidutinė vertė yra 600 000–700 000 TV / ml. 800 000 TV / ml ir daugiau rezultatų yra laikomi aukštais RNR turinčio viruso kiekiais.

Genotipavimas

Dėl didelio HCV mutacijų aktyvumo, atliekant tyrimą, svarbu nustatyti, kuris viruso genotipas yra paciento kraujyje. Iš viso planetoje buvo užfiksuoti 11 hepatito C viruso genotipų, kuriuose yra daug pogrupių (potipių). Rusijos Federacijos teritorijoje pasiskirstė 1,2 ir 3.

Hepatito C PCR RNR ir genotipų nustatymas yra labai svarbi analizės dalis leidžia gydytojui nustatyti viruso atsparumą (atsparumą), parinkti tinkamus vaistus ir paskirti gydymo kursą.

Genotipavimas taip pat leidžia netiesiogiai nustatyti kepenų būklę. Pavyzdžiui, 3 HCV genotipą dažnai lydi steatozė, kurioje riebalai kaupiasi organo ląstelėse.

Kraujo tyrimas, skirtas C hepatito PCR, turėtų sudaryti skaičių, kuris lemtų genotipą. Laboratoriniai atsakymai gali pasakyti „neužrašyti“ - ir tai reiškia, kad virusas yra žmogaus kraujyje, kurio nepavyko nustatyti bandymo sistema. Tai gali reikšti, kad genotipas nėra būdingas konkrečiai geografinei vietovei. Tokiu atveju analizę reikia pakartoti su didesniu diagnostinės sistemos jautrumu.

C hepatito PCR analizės dekodavimas

C hepatito PCR kiekybinio iššifravimo testas gali būti pagrįstas pirmiau nurodytais duomenimis. Gavę laboratorinių tyrimų rezultatus paprastai rašomi šie duomenys:

• „Rasta“ / „nerastas“ (aukštos kokybės C hepatito PGR);
• RNR turinčių frakcijų skaičius, pavyzdžiui, 831,680 ME / ml (kiekybinė PGR analizė);
• paveikslas, nustatantis HCV genotipą, pavyzdžiui - 1, 2, 3, 4;
• Bandymo pavadinimas dažniausiai yra realiu laiku.

Svarbiausias hepatito C PCR analizės iššifravimas yra antrasis elementas, rodantis virusinę apkrovą, kuri lemia gydymo prognozę, metodą ir trukmę.

Jei hepatito C PCR testas yra neigiamas, o ELISA yra teigiamas - ką tai reiškia?

Norint iššifruoti laboratorinius tyrimus, svarbu susisiekti su hepatologu arba infekcinės ligos specialistu, kuris paaiškins gautą informaciją pagal diagnostikos sistemos tipą ir jautrumo slenkstį. Medicinos praktikoje yra daug kraujo tyrimų duomenų, kurie gali klaidinti asmenį be medicininio išsilavinimo.

Pavyzdžiui, jei C hepatito PCR bandymas yra neigiamas ir ELISA yra teigiamas, tai gali reikšti, kad šiuo metu paciento kraujyje nėra HCV, tačiau anksčiau jis patyrė ūmaus hepatito C formą. kraujyje yra antikūnų, kurie buvo sukurti po invazijos į virusą praeityje. Tačiau šiuolaikinėje medicinos praktikoje ELISA analizė laikoma nepakankamai patikima ir dažnai suteikia netipinių rezultatų, todėl gydytojai ją naudoja kaip pirminį patikrinimą. Diagnozuojant ligą, specialistai tiksliai vadovaujasi PCR testais.

Naudingas vaizdo įrašas

Šis vaizdo įrašas labai išsamiai ir įdomiai pasakoja, kokia yra PGR metodo esmė, kaip atliekama analizė:

Išvada

C hepatito PCR analizei paprastai imamas veninis kraujas. Dažniausiai yra dvigubas biologinės medžiagos kiekis - ELISA ir tiesiogiai PCR bandymui. Kad būtų gauti teisingi bandymų rezultatai, būtina laikytis pagrindinių biologinės medžiagos laboratorinių duomenų rinkimo taisyklių:

• kraujas analizei pateikiamas pirmąją dienos pusę tuščiu skrandžiu;
• tarp valgio ir kraujo surinkimo turėtų trukti ne mažiau kaip 8 valandos;
• Prieš pradedant tyrimą, taip pat reikėtų atsisakyti alkoholio ir kepti maisto produktai.
• per dieną prieš kraujo donorystę būtina vengti didelio fizinio krūvio.

Kraujo tyrimo rezultatai paprastai pasiruošę kitą dieną.